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Mechanism elucidation of complications of multiple myeloma on exosome analysis.

外泌体分析阐明多发性骨髓瘤并发症的机制。

基本信息

批准号：
19K07922
负责人：
飯島史朗
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Bunkyo Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

多発性骨髄腫（multiple myeloma; MM）の診断等には、侵襲性が高い検査が必要であることから、新たなバイオマーカーの開発が期待されている。本研究では、腫瘍の転移に関わるエクソソームおよび糖鎖をターゲットとしたMMの新たなバイオマーカー開発を試みている。ヒト骨髄腫細胞株(RPMI8226)をMMの増悪因子IL-6または抑制因子IL-27で刺激し、刺激前後の培養上清から、超遠心法によりエクソソームを、アフィニテークロマトグラフィーによりM蛋白を回収した。エクソソームまたは細胞表面に結合している糖鎖、およびM蛋白結合糖鎖は、21種のレクチンを用いて、フローサイトメトリー法、レクチンブロット法により解析した。また、エクソソーム内包蛋白は2次元電気泳動法および質量分析法で解析した。エクソソーム内包蛋白の2次元電気泳動法では、IL-6刺激により3つのスポット［スポットは、スポットA (pI 9.3, MW 50 kDa)、スポットB (pI 9.2, MW 42 kDa)、スポットC (pI 9.2, MW 34 kDa)］が増加した。これらのスポットを質量分析後MASCOT解析した結果、スポットAはATP synthase subunitα,mitochondria、スポットBはEF1A1 (Elongation factor1-α1)、スポットCはG3P (Glyceraldehyde 3-phosplate dehydrogenase)と同定し、これらの蛋白は、MMの増悪に関与し、MMの新たなマーカーとなり得ると予想した。また、糖鎖の解析では、IL-6刺激により、同じMM細胞から分泌されるエクソソームとM蛋白で変化した糖鎖が異なったことより、これらが異なるマーカーになる可能性を示唆した。

Multiple osteoporosis (multiple myeloma; MM) is highly invasive, but it is necessary to do so, and new ones are expected to be used. The purpose of this study is to determine whether or not the sugar will be used in this study. In this study, the MM will be renewed in the first half of the year. Bone marrow cell line (RPMI8226), MM cell line (IL-6), inhibitor IL-27 (inhibitor), supernatant (supernatant), supernatant (supernatant) and supernatant (M protein) before and after stimulation. The cell surface of the cell was analyzed by the combination of glucose, protein and protein, the use of 21 kinds of protein, the method of cell surface chromatography, the method of enzyme chromatography and the method of molecular weight analysis. The two-dimensional swimming method, quantitative analysis, quantitative analysis and quantitative analysis. The two-dimensional swimming method of inclusion protein, IL-6 stimulation, pI, MW 50 kDa, pI 9.2, MW 42 kDa, pI 34 kDa). After quantitative analysis, the results of MASCOT analysis, ATP synthase subunit α, mitochondria, Elongation factor1- α 1, Elongation factor1- α 1, C G3P (Glyceraldehyde 3-phosplate dehydrogenase) homology, protein, MM and MM were analyzed. IL-6 stimulates the secretion of glucose, glucose, M protein, glucose, protein, M protein, M protein, M