鼻アレルギーの分子免疫学的解析

鼻过敏的分子免疫学分析

• 批准号: 05771333
• 负责人: 宇野 正志
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771333/
• 关键词: ダニ特異的T細胞クローン; in vitro IgE産生; TCR レパトア

ダニ鼻アレルギー患者及び、健常対照者よりコナヒョウヒダニ特異的T細胞クローンを樹立しin vitroに於るIgE生産系を確立すると共に、IgEクラスの免疫応答に関与するT細胞の特徴、特にそのT細胞レセプターのgene usageに偏寄りが見られるか否か検討を加えた。即ち先ず、T細胞クローンと自己B細胞抗原提示細胞抗原とを混合培養し、培養上清と全細胞を回収した。全細胞からtotal RNAを抽出し,IgE生産の有無を検討するために、CHepsilon2ドメイン内のユニークな塩基配列に相補的な合成核酸を作成し、Dat blat hybridigationを行いIgE生産を確認した更にそれがダニ抗原特異的であることを証明するために、ダニ抗原、抗ヒトIgE抗体を用いてELISAを行い各上清中のダニ抗原特異的IgE抗体の存在を明らかにした。しかし、同時にIgGのCHgamma1ドメイン内の塩基配列に相補的な合成核酸を用いたIgGmRNAの検索を行うと、同一のクローンが同時にIgGクラスの免疫応答も促し得る事が明らかになった。即ち、IgEクラスの応答に選択的に関与しているT細胞クローンは存在していなかった。又、以上の結果は患者より得られたT細胞クローンのみならず健常対照者より得られたクローンに関しても同様であった。次いでT細胞クローンのT細胞レセプターのV gene usageを検討した。患者、健常対照者の両ドナーは血清学的なHLAのタイピングでは抗原性を全く共有していない。各クローンより得たtotal RNAをもとに RT-PCR法を行い、Valpha,Vbetafamilyの検索を行うとドナーの由来に関わらず、Vbeta6,Valpha8subfamilyの使用頻度が高かった。上記の結果を踏まえ、in vitroに於るT細胞の局在について現在検討を加えている所である。又、数年来、我々が報告しているダニ鼻アレルギー発病因子の一つであるHLA抗原中のDQw9抗原と上記、V gene family及び 抗原上のT細胞エピトープとの間に具体的にどの様な相関が見られるのか検索を進めて行く予定である。

ダ ニ nasal ア レ ル ギ ー patients and び, health often as seaborne よ り コ ナ ヒ ョ ウ ヒ ダ ニ specific T cells ク ロ ー ン を set し in vitro に を る IgE production department establish す る と に, total IgE ク ラ ス の immune 応 answer に masato and す る t-cell の 徴, especially に そ の t-cell レ セ プ タ ー の gene usageに sent to が が see られる 検 no 検 検 ask for を and えた. That is, ち first ず, T cells <s:1> ロ <s:1> <s:1> と と と their own B cell antigens suggest cell antigens とを mixed culture <s:1>, culture supernatant と whole cells を reproduce <s:1> た. Whole-cell か ら to extract total RNA を し, IgE production の presence of を beg す 検 る た め に, CHepsilon2 ド メ イ ン within の ユ ニ ー ク な salt base with column に fill な synthetic nucleic acid を make し, Dat blat Line hybridigation を い IgE production を confirm し た more に そ れ が ダ ニ antigen specific で あ る こ と を prove す る た め に, ダ ニ antigen, resisting ヒ ト を IgE antibody with い て ELISA in each line を い supernatant の ダ ニ antigen specific IgE antibody の exist を Ming ら か に し た. し か し, at the same time に IgG の CHgamma1 ド メ イ ン の in salt base with column に fill な synthetic nucleic acid を with い た IgGmRNA の 検 cable line を う と, same の ク ロ ー ン が while に IgG ク ラ ス の immune 応 answer も promote し る is が Ming ら か に な っ た. Namely ち, IgE ク ラ ス の 応 answer に sentaku に of masato and し て い る t-cell ク ロ ー ン は exist し て い な か っ た. Again, the results of the above の は patients with よ り have ら れ た t-cell ク ロ ー ン の み な ら ず health often according to the seaborne よ り have ら れ た ク ロ ー ン に masato し て も with others で あ っ た. Subで でT cells ロ ロ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> T cells レセプタ <s:1> <s:1> V gene usageを検 for <s:1> た. Patients, the health often as seaborne の struck ド ナ ー は serological HLA な の タ イ ピ ン グ で は antigenicity を across く し て い な い. Each ク ロ ー ン よ り have た total RNA を も と に rt-pcr method を い, Valpha, Vbetafamily の 検 cable line を う と ド ナ ー の origin に masato わ ら ず, Vbeta6 Valpha8subfamily の using high frequency が か っ た. Written の results を tread ま え, the in vitro に in る t-cell の bureau in に つ い を て 検 now please add え て い る で by あ る. Again, over the years, I 々 が report し て い る ダ ニ nasal ア レ ル ギ ー 発 disease factor の つ で あ る HLA antigens in の DQw9 antigen と written, V gene family and び antigen の t-cell エ ピ ト ー プ と の に between specific に ど の others な phase masato が see ら れ る の か 検 cable を into め て line く designated で あ る.