ダニ抗原特異的IgE抗体産生に関わるクローン化T細胞の解析

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現在、健常人、鼻アレルギー患者及び、減感作療法施行中の患者の末血及び、鼻腔の所属リンパ装置より、Magnetic cell sorterを用いたpositive-negative selectionによってnaive B細胞の分離を行っている。得られたnaive B細胞を漸次in vitroに於てanti-CD40及びIL-4で刺激しIgEへのクラススイッチを誘導し、その際、経時的に発現されるIgG4,IgEの細胞膜表面への発現及び分泌をflowcytometry及びELISAを用いて観察している。更に、IgG4,IgEの発現はひとつのB細胞に於て、Sμ-Sγ4switch recombinationを介して、Sγ4-Sεへのsequential switchの結果起こると言われておりそうした機序が実際に起こってるのか否かNested PCRを用いてdeletional circular DNAsを検出し検討を加える予定である。また、減感作療法施行中の鼻アレルギー患者では、血清IgG4が有意に上昇することが知られているが、同様の方法論を用いて、このrecombinationの機構に何らかのバイアスが加わっていないか検討を加える予定である。