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In situハイブリダイゼーション法による肥大軟骨細胞の機能発現の解析

原位杂交法分析肥大软骨细胞的功能表达

基本信息

批准号：
05771490
负责人：
横瀬敏志
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771490/
关键词：
軟骨内骨化肥大軟骨細胞基質蛋白 in situハイブリダイゼーション

项目摘要

軟骨内骨化のメカニズムを探る目的で、ラット肥大軟骨細胞における基質蛋白遺伝子の発現をin situハイブリダイゼーション法を用いて調べた。1)材料と方法:正常ラット(8週令)及び下垂体除去ラットの下顎頭と大腿骨を用いて脱灰組織のパラフィン切片を作成しin situハイブリダイゼーション法と免疫組織化学染色を行った。プローブはラット由来のType Iコラーゲン、オステオカルシン、オステオポンチン、マトリックスGIa蛋白のcDNAからDIGを用いて標識した非放射性RNAプローブを用いた。免疫組織化学では、ラットのType Iコラーゲンとオステオカルシンに対するポリクローナル抗体を用いた。2)結果:正常ラットにおける肥大軟骨細胞ではオステオポンチンとマトリックスGIa蛋白の遺伝子発現が見られた。Type Iコラーゲンとオステオカルシンは一次海面骨の骨芽細胞に遺伝子および蛋白の発現が見られたが、肥大軟骨細胞には見られなかった。下垂体除去ラットの肥大軟骨細胞でのオステオポンチンとマトリックスGIa蛋白の遺伝子の発現は正常ラットのものに比べて著しい減弱を示した。3)考察:軟骨内骨化に重要な役割を果たしていると考えられる肥大軟骨細胞に、オステオポンチンとマトリックスGIa蛋白が遺伝子レベルで発現されており、さらに骨格の成長に著しい影響を与える下垂体除去ラットの肥大軟骨細胞では、これらの基質蛋白の遺伝子発現が減弱していることが確認された。これらの所見よりオステオポンチンとマトリックスGIa蛋白は軟骨内骨化と密接に関連した蛋白であることが示唆された(現在投稿準備中)。ラット軟骨のプロテオグリカンのコア蛋白とType XコラーゲンのcDNAより作成したプローブを用いて肥大骨軟骨細胞のものに機能変化を現在検討中である。

The development of matrix protein in cartilage ossification is regulated by the method of tissue culture. 1)Materials and Methods: Normal (8 weeks old) and hypophysis were removed from the mandible and thigh bones. The sections of demineralized tissues were prepared by immunohistochemical staining. The gene expression of the non-radioactive RNA is identified by the gene expression of the Type I gene, and the gene expression of the type I gene. Immunohistochemistry is used to detect the presence of Type I antibodies. 2)Results: The expression of GIa protein in normal hypertrophic chondrocytes was detected. Type I osteoblasts and hypertrophic chondrocytes are the first to develop osteoblasts and proteins in the sea. The expression of GIa protein in hypertrophic chondrocytes of the pituitary gland was reduced compared with that of normal chondrocytes. 3)Investigation: Endochondral ossification is important for the development of hypertrophic chondrocytes, and it is confirmed that hypophysis is an important factor affecting the growth of bone. This is the first time I've seen a GIa protein that's related to endochondral ossification. The gene expression of cartilage protein and Type X protein is currently under discussion.