蛍光検出高速液体クロマトグラフィーによるアラキドン酸代謝物の解析

荧光检测高效液相色谱法分析花生四烯酸代谢物

• 批准号: 05771981
• 负责人: 八巻 幸二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771981/
• 关键词: アラキドン酸代謝物; 蛍光誘導体化; 高速液体クロマトグラフィー; ラットマクロファージ; フォスホリパーゼA_2

アラキドン酸代謝物のリポキシゲナーゼ産物について定量化の検討を行った結果、85%アセトニトリルで溶出することが確認された。またアラキドン酸自身は95%で溶出されることが確認されたので、ステップワイズ溶出を用いてこれらの物質の同時測定を可能にした。この方法でバクトペプトンで浸潤したラット腹腔マクロファージからの刺激に伴って遊離されるアラキドン酸を測定した。刺激薬として発癌プロモーターのひとつであるフォルボールミリステートアセテートを用いた。その結果アラキドン酸代謝物のうちトロンボキサン産生が最も多く、次に6-ケトープロスタグランジンF_<1alpha>の産生が多かった。またアラキドン酸自身も遊離が認められた。またアラキドン酸の遊離は約1時間でほぼプラトーに達するのに対し、アラキドン酸代謝物はさらに産生が続いた。フォルボールミリステートアセテートはプロテインキナーゼCを活性化することが知られているので、プロテインキナーゼCの抑制薬として知られるH-7を用いた結果、有意な抑制を示し、この反応うにはプロテインキナーゼCの作用を介していることが示唆される結果が得られた。フォスホリパーゼA_2の抑制薬としてp-brom ophenacylbromide(BPB)の効果を調べたところ、5muMではアラキドン酸遊離をほとんど抑制せずTX産生を20%抑制した。50muMでは両者共に約40%抑制されたことから、BPBがTX合成酵素も抑制するのか、またはBPBに感受性の異なるフォスホリパーゼA_2が関与しているのかという疑問が生じた。この点については今後の検討課題である。

The results of the quantitative analysis of the acid metabolites in the sample were confirmed to be 85% soluble. 95% dissolution of the acid itself is confirmed by simultaneous determination of the substance. The method includes the following steps: The stimulation of cancer can be used to prevent cancer from occurring. The results showed that the production of acid metabolites was the most frequent, and the production of 6-amino acid metabolites was the most frequent<1alpha>. The acid itself is free and easy to recognize. The release of the acid takes about 1 hour to complete, and the acid metabolites are produced. The results of the study showed that the inhibition of H-7 was the result of intentional inhibition, and that the inhibition of C was the result of the study. The effect of p-brom phenacylbromide (BPB) on the inhibition of A_2 is regulated by 20%. 50muM of the total inhibition of TX synthase inhibition, BPB, and BPB sensitivity differences between A_2 and the middle of the question. This is the first time I've seen a problem.