ミオシンATPaseの遷移状態を形成する複合体のF^^<19>-NMRによる解析

形成肌球蛋白ATP酶过渡态的复合物的F^^<19>-NMR分析

• 批准号: 05780488
• 负责人: 丸田 普策
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780488/
• 关键词: 筋収縮; ミオシンATPase; エネルギートランスダクション; 遷移状態アナログ; ATPアナログ; F^^<19>-NMR

1.ATPアナログ2-〔(4-trifluoro-methl-2-nitrophenyl)amino〕ethyl diphosphate(TFNTP)の合成を行ない、ミオシンに対するATPase(TFNTPase)活性及びアクチン活性化Mg^<2+>-ATPase(TFNTPase)活性を測定することにより、ミオシンの基質になることを確認した。またゲル濾過でミオシン/TFNDP/A1F^-_4,BeFn,Vi複合体が形成されていることを確認した。A1F^-_4,BeFn,Viのそれぞれの複合体において、ミオシンに結合したTFNDPのF^^<19>-NMRの化学シフトはフリーのものと異なっていた。このことから複合体のTFNDPだけを特異的にモニターできることがわかった。A1F^-_4,BeFn,Viの3種類の複合体中のTFNDPのF^^<19>-NMRの化学シフトを比較するとA1F^-_4の化学シフトはBeFn,Viのものより低磁場側にシフトしていた。このことは、複合体中のATP結合部位での構造がA1F^-_4とBeFn,Viにおいて異なっていることを示していると考えられる。これらの結果は複合体とアクチンとの相互作用の実験結果と一致しており、これらの複合体がミオシンATPaseのkinetic pathwayにおいて異なったステップを形成している可能性を示唆していると思われる。またBeFn複合体のTFNDPのF^^<19>-NMRのシグナルはシングルではなく近接した二つのピークが得られ、複合体中のTFNDPの状態が複数あることが示された。BeFn自体のF^^<19>-NMRの解析ではBeに結合したフッ素の数が異なる種が少なくとも4つあることがわかった。このことからBeFnの異なった種によって形成された複合体ではTFNDPの位置に影響を与えると考えられる。

1. The synthesis of ATP-2-[(4-trifluoro-methyl-2-nitrophenyl)amino] ethyl diphosphate(TFNTPP) was carried out and the corresponding ATPase(TFNTase) activity and Mg^<2+>-ATPase(TFNTase) activity were determined. It was confirmed that the complex of TFNDP/A1F^-_4,BeFn,Vi was formed. A1F^-_4, BeFn, Vi and their mixtures were synthesized by F^<19>-NMR and chemical analysis. The TFNDP of the complex is unique. A comparison of the chemical structure of TFNDP in three kinds of complexes of A1F^-4, BeFn,Vi with <19>that of A1F^-4, BeFn,Vi in low magnetic field. The structure of ATP binding site in complex is A1F^-_4 BeFn,Vi The results of the interaction between the two complexes are consistent with the results of the interaction between the two complexes and the kinetic pathway of the ATPase. F^^ -NMR spectra of TFNDP in BeFn complexes <19>show that TFNDP in the complex is in a complex state. BeFn self F^^<19>-NMR analysis is not combined with the number of different species. A complex of TFNDP's position is formed.

项目成果

Maruta,S.et al.: "Myosin-ADP-Fluoroaluminate and Myosin-ADP-Fluoroberyllate Ternary Complex As transition State Analogue" Biophysical Journal. 64. 141 (1993)

Maruta,S.et al.：“肌球蛋白-ADP-氟铝酸盐和肌球蛋白-ADP-氟硼酸三元复合物作为过渡态类似物”生物物理学杂志。

Maruta,S.et al: "Formation of the Stable Myosin-ADP-Aluminium Fluoride and Myosin-ADP-Beryllium Fluoride Complexes and their analysis using F^^<19>-NMR" Journal of Biological Chemistry. 268. 7093-7100 (1993)

Maruta,S.et al：“稳定肌球蛋白-ADP-氟化铝和肌球蛋白-ADP-氟化铍复合物的形成及其使用 F^^<19>-NMR 的分析”生物化学杂志。

Henry,G.D.et al.: "Observation of Multiple MyosinSubfragment-1:ADP:Fluoroberyllate Complexes by F^^<19>-NMR" Biochemistry. 32. 10451-10456 (1993)

Henry，G.D.等人：“通过F^^ 19 -NMR观察多个肌球蛋白亚片段-1：ADP：氟代苯磺酸盐复合物”生物化学。

Maruta,S.et al.: "Photoaffinitylabelling of smooth Muscle Myosin by Methylanthraniloyl-8-azido-ATP" Biochemical Journal. 292. 439-444 (1993)

Maruta,S.et al.：“通过甲基蒽酰基-8-叠氮基-ATP 对平滑肌肌球蛋白进行光亲和标记”生物化学杂志。

Takashi,R.et al: "Time-Resolved Fluorescence Studies of Stable Smooth Muscle Myosin Complexes with ALF^-_4,BeFn and Vi" Biophysical Journal. 64. 143 (1993)

Takashi,R.et al：“稳定平滑肌肌球蛋白复合物与 ALF^-_4、BeFn 和 Vi 的时间分辨荧光研究”生物物理学杂志。