ミオシンATPaseを阻害する新規生物活性物質のミトシン頭部上の作用部位の決定

抑制肌球蛋白 ATP 酶的新型生物活性物质在核分裂激素头部的作用位点的测定

• 批准号: 01580146
• 负责人: 平塚 寿章
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580146/
• 关键词: ミオシンATPase; 生物活性物質; ATPase阻害剤

沖縄県のケラマ諸島と与那国島の水深25〜30mで採集した特定の海綿(種は不明)のアセトン抽出物中にミオシンATPaseを阻害する活性を見出した。得られた抽出液を濃縮後凍結乾燥し、20mM炭酸アンモニウムに溶解してセファデックスマクロマトグラフィ-にかけ、活性画分を集めてフェニルセファロ-スCL4Bのクロマトグラフィ-にかけてさらに精製した。このようにして得られたミオシンATPaseを阻害する新規生物活性物質は、分子量約6000のペプチドで、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、グリシンに富み、極性アミノ酸と疎水性アミノ酸をほぼ1:1の割合で含む両親媒性ペプチドであった。ミオシンATPase反応や筋収縮の試験管内モデルと考えられているアクトミオシンの超沈澱反応は、このペプチドが10〜400ng/mlの濃度で共存すると完全に阻害された。ATPase活性部位を含むミオシン頭部(S-1)の23Kドメインを9-アントロイルニトリルで螢光標識したAN-S-1を調製した。AN-S-1はMg^<2+>-ATAase活性が損なわれいないのみならず、ATP加水分解反応に伴って生ずるミオシン頭部の構造変化を、S/N比の大きな螢光スペクトル変化として知らせてくれる。AN-S-1に海綿から単離した活性ペプチドを加えると螢光強度が変化した。また、活性ペプチド共存下でAN-S-1にATPを加えても、ATP加水分解反応に伴う螢光スペクトル変化は全く観測されなかった。以上の結果から問題の活性ペプチドはミオシン頭部の23Kドメインに作用して、ミオシンATPase活性を阻害することが示唆された。

The activity of ATPase was detected in the extract of specific sponges (species unknown) collected from the islands of Okinawa and Japan at water depths of 25 ~ 30m. The extract was concentrated, freeze-dried, and dissolved in 20mM carbonic acid. The active fraction was collected and purified. The new bioactive substance has a molecular weight of about 6000, and is a mixture of a polar acid, a neutral acid, and a neutral acid. The concentration of the enzyme in the supernatant of the sample tube was 10 ~ 400ng/ml, which completely prevented the blue shift. The ATPase active site contains a 23K fluorescence marker for the head (S-1). AN-S-1 Mg^<2+>-ATAase activity is reduced, ATP hydrolysis reaction is accompanied by structural changes in the head, S/N ratio is increased, fluorescence is changed, and so on. AN-S-1 is a sponge with a high fluorescence intensity. ATP addition, ATP hydrolysis reaction and fluorescence detection under active blue shift The above results show that the activity of the enzyme is inhibited by the 23K enzyme in the head of the enzyme

项目成果

Toshiaki Hiratsuka: "Probing the Mechanism of the Formation of a Stable Complex between Myosin ATPase,ADP,and Vanadate Using Fluorescently Labeled Myosin Subfragment 1" Journal of Biological Chemistry. 265. (1990)

Toshiaki Hiratsuka：“利用荧光标记的肌球蛋白亚片段 1 探讨肌球蛋白 ATP 酶、ADP 和钒酸盐之间形成稳定复合物的机制”《生物化学杂志》。

Toshiaki Hiratsuka: "Conformational Changes in the 23-kDa NH_2-terminal Segment of Myosin ATPase Associated with ATP Hydrolysis" Journal of Biological Chemistry. 265. (1990)

Toshiaki Hiratsuka：“与 ATP 水解相关的肌球蛋白 ATP 酶 23-kDa NH_2 末端片段的构象变化”生物化学杂志。