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ミオシンATPaseの遷移状態を形成する複合体の^<19>F-NMRによる解析

^19F-NMR分析形成肌球蛋白ATP酶过渡态的复合物

基本信息

批准号：
06780543
负责人：
丸田晋策
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Soka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リボースをフッ素で標識したADPアナログ,4-fluorobenzoic-ADP(4-FB-ADP)の合成を行ない、骨格筋ミオシン及び3種類のリン酸アナログ、AlF_4^-,BeFn,Viを用いて複合体を形成を行なった。regular ADPと同程度の安定な複合体が形成されていることをゲル濾過、透析により確認した後、各複合体の^<19>F-NMRスペクトルの測定を行なった。各複合体の4-FB-ADPに依存する^<19>F-NMRのシグナルにおいて化学シフトの差異は見られなかった。平成5年度の研究計画によるアデニン環に相当する部位をフッ素で標識したATPアナログ,2-[(4-trifluoro-methyl-2-nitrophenyl)amino]ethyl diphosphate(TFNDP)を用いた^<19>F-NMRの実験では、3種類の複合体のATP結合部位の間に構造の差異が明らかに見られた。これらの結果から遷移状態を形成すると思われる3種類の複合体においてATP結合部位のリボースが結合する部位では構造が異なっておらず、アデニン環結合部位での構造が異なっていると思われる。各複合体を形成するミオシン頭部の局所的な部位、特に反応性の高い活性リジン(Lys83)、活性システイン[SH1(Cys707)-SH2(Cys697)]が存在する部位での構造変化をTNBS,ABDFといった特性紫外吸収あるいは蛍光をもった試薬による化学修飾で調べた結果、BeFnとViの複合体ではATP存在下に類似した状態を示し、AlF_4^-複合体ではATPが無い状態に近いことがわかった。以上の結果からミオシン頭部のATP結合部位ばかりでなく、アクチン結合部位とATP結合部位の間に存在するRLR,SH1-SH2領域での局所的な部位における構造が各複合体で異なっていると考えられる。

The 4-fluorobenzoic-ADP (4-FB-ADP) tag is used to synthesize lines, skeletons and skeletons, and AlF_ 4 ^ -. BeFn,Vi uses a complex to form a line. The same degree of regular ADP diazepam complex was formed. After passing and confirming the infection by dialysis, each complex ^ & lt;19>F-NMR was tested by Elisa. Each complex "4-FB-ADP" depends on the chemical composition of the complex ^ & lt;19>F-NMR. In Pingcheng five-year research plan, the key parts of the environmental protection environment are known as "ATP", "2-[(4-trifluoro-methyl-2-nitrophenyl) amino] ethyl diphosphate (TFNDP)" using "^ & lt;19>F-NMR", and "3" hybrid ATP. The combination of the device and the device is used to create a precision sensor. The results of the experiment show that the transfer pattern is caused by the combination of the two parts of the ATP, the combination of the two parts, the combination of the two parts, and the combination of the two parts, and the combination of the two parts makes the combination of the two parts. The complex forms the site of the complex, the specific site of the complex, the highly reactive site (Lys83), the active site [SH1 (Cys707)-SH2 (Cys697)], the site of the complex, the site of the complex, and the site of the TNBS. The characteristic of ABDF is UV absorption, the UV absorption spectrum, the chemical modification results, the BeFn Vi complex ATP, and the AlF_ 4 ^-complex template ATP stateless status indicator. The above results show that there is a significant difference between the two parts in the combination of ATP and ATP, which are located in the field of RLR,SH1-SH2.