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転写因子APIの活性化に関与するプロテインキナーゼCの基質の固定

参与转录因子 API 激活的蛋白激酶 C 底物的固定化

基本信息

批准号：
05780506
负责人：
平井秀一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780506/
关键词：
AP1 jun ras プロテインキナーゼC

项目摘要

NIH3T3細胞において、発現されているPKC分子種(PKCalpha,delta,epsilon)の中でPKCdeltaの高発現によるTKC-tk-CATリポーター遺伝子の発現増強が観察された。PKCdelta高発現の効果はTPA刺激により更に増強されたが、偽基質配列中のアミノ酸置換によって得た活性化PKCdeltaの導入によりTPA非依存的なリポーター遺伝子の強い発現が観察され、このことからPKCdeltaの活性化がAP1/Junの活性化に充分であると判断された。同遺伝子の発現増強は、活性型H-Rasまたは活性型c-Rafをc-JunまたはJunDと共に導入した際にも認められた。これら癌遺伝子産物による遺伝子発現の増強とPKCによるそれとが同一の細胞内情報伝達経路に乗っているものなのか、別経路を介したものなのかを探るため、PKC及び癌遺伝子のdominant negative mutantを利用した解析を行った。PKCdeltaのATP結合部位にアミノ酸置換を起こすことによりdominant negative PKCdeltaを得たが、この変異体は活性型PKCdeltaによるAP1/Junの活性化を阻害下にも係わらず、Ras/Junによる活性化にはほとんど効果を示さなかった。一方、dominant negative(Ras-Asn17)は活性型PKAによるTRE-tk-CATの発現増強を著しく阻害した。このことはPACが細胞内情報伝達の流れの中でこれら癌遺伝子の上流に位置することを強く示唆するものである。しかし活性型のH-RasやC-Rafのみにより活性型PKCと同等の効果を得ることはできず、c-Junを高発現させることが必要であった。このことはPKCdeltaが内在生のJunを活性化できるのに対してReaやRafにはそれができないことを示唆するもので、PKCdeltaの下流にはRas-Raf-MEK-MAPKを介したJunの活性化経路のみならず他のJun活性化経路が存在するものと考えられる。

NIH 3T3 cells were found to be highly active in PKC delta, PKC delta. PKC delta activation was detected by TPA stimulation and by acid substitution in pseudo-matrix alignment. In the same way, H-Ras and c-Jun are introduced into the system. The expression of PKC and the dominant negative mutant of PKC gene in the same intracellular signaling pathway are enhanced. The ATP binding site of PKC delta is blocked by acid substitution, and the dominant negative PKC delta is blocked by activation of AP1/Jun. A dominant negative(Ras-Asn17) inhibits the development of TRE-tk-CAT in active PKA. This is the first time that PAC has been involved in cellular information transmission. H-Ras, C-Raf, and PKC are the most active forms of PKC. This is the first time that PKC delta has been activated in Jun, and the second time that PKC delta has been activated in Jun, and the third time that PKC delta has been activated in Jun by Ras-Raf-MEK-MAPK.