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疎水性指標を用いた水性2相系におけるタンパク質分配係数の推定法

利用疏水性指数估算水两相体系中蛋白质分配系数的方法

基本信息

批准号：
05750676
负责人：
古屋武
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

バイオテクノロジーにおける分離・精製法として水性二相分配法が注目されている。水性二相分配法による分離プロセスを設計する際には、水性二相分配系液液平衡と分離目的物質の分配係数は基礎データとして非常に重要となる。そこで、デキストラン(DEX)とポリエチレングリコール(PEG4000)からなる水性二相分配系液液平衡を、DEX分子量を4種類変えて測定した。その際、ポリマー系の液液平衡で重要となる、相分離後の上下両相のポリマー分子量分布についても測定した。DEXの分離量は、数平均分子量18800〜191000の範囲で4種類変えて、測定を行った。測定温度は20℃で、ポリマー組成と分子量分布の測定にはサイズ排除クロマトグラフィーを用いた。分子量分布の測定結果から、分子量分布の広いDEXは上下両相でポリマーの分別が生じていることが確認された。また、代表的な加水分解酵素である、alpha-アミラーゼ、beta-アミラーゼおよびグルコアミラーゼの分配係数を、20℃で、上述の水性二相分配系において測定した。分配係数は同類のアミラーゼであっても各酵素ごとに異なることが示された。さらに、経験的に相互作用項を改良した、修正Flory-Huggins式を用いて測定データの相関を行った。相互作用パラメータにポリマー分子量依存性を、相互作用項にはランダム混合からの偏倚を考慮するパラメータを、それぞれ経験的に導入した。DEXの分子量分布を分布関数を用いて近似し、連続熱力学の手法を用いて相平衡計算を行った。相互作用パラメータを最適化することにより、分子量の種々異なるデキストラン-ポリエチレングリコールからなる水性二相分配系液液平衡と、加水分解酵素の分配係数を良好に相関できた。液体クロマトグラフィーによる疎水性指標の測定については、測定条件、使用カラムを文献調査を行って検討し予備実験を行った。

The separation and purification method and the aqueous two-phase partition method have attracted much attention. In the design of aqueous two-phase partition method, the partition coefficient of liquid-liquid equilibrium of aqueous two-phase partition system is very important The molecular weight of DEX was determined by four different methods: liquid-liquid equilibrium of aqueous two-phase distribution system and molecular weight of DEX. The liquid-liquid equilibrium of the system is important, and the molecular weight distribution of the upper and lower phases after phase separation is determined. DEX separation amount, number average molecular weight 18800 ~ 191000 range, 4 kinds of different, determination. Determination of molecular weight distribution at 20℃The molecular weight distribution was determined by the method of determining the molecular weight distribution. The partition coefficient of the aqueous two-phase partition system described above was determined at 20℃. The partition coefficient is similar to that of the enzyme. In addition, the interaction term of the ring is improved and the Flory-Huggins formula is modified to determine the correlation between the ring and the ring. The interaction term is molecular weight dependent. The molecular weight distribution of DEX is approximated by thermodynamic methods and calculated by phase equilibrium. The liquid-liquid equilibrium of aqueous two-phase partition system and the partition coefficient of hydrolytic enzyme are well correlated. Determination of water quality index of liquid, determination conditions, application, literature review, preparation and implementation