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疎水性指標による水性2相系におけるアミノ酸・ペプチドの分配係数の推定

使用疏水性指数估计水性两相系统中氨基酸和肽的分配系数

基本信息

批准号：
06750775
负责人：
古屋武
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

バイオテクノロジーにおける分離・精製法として水性二相分配法が注目されている。水性二相分配法による分離プロセスを設計する際には、水性二相分配系液液平衡と分離目的物質の分配係数は基礎データとして非常に重要となる。そこで、デキストラン(DEX T500,Mn=170300,Mw/Mn=2.95)とポリエチレングリコール(PEG20000,Mn=17100,Mw/Mn=1.16)からなる水性二相分配系液液平衡を測定した。その際、ポリマー系の液液平衡で重要となる、相分離後の上下両相のポリマー分子量分布についても測定した。測定温度は20℃で、ポリマー組成と分子量分布の測定にはサイズ排除クロマトグラフィーを用いた。分子量分布の測定結果から、分子量分布の広いDEX T500は上下両相でポリマーの分別が生じていることが確認された。また、代表的な加水分解酵素である、α-アミラーゼ、β-アミラーゼおよびグルコアミラーゼの分配係数を20℃で上述の水性二相分配系において測定した。分配係数は同類のアミラーゼであっても各酵素ごとに異なることが示された。さらに相互作用パラメータにポリマー分子量依存性を、相互作用項にはランダム混合からの偏倚を考慮するパラメータをそれぞれ経験的に導入した、修正Flory-Huggins式を用いて測定データの相関を行った。DEXの分子量分布を分布関数を用いて近似し、連続熱力学の手法を用いて相平衡計算を行った。相互作用パラメータを最適化することにより、水性二相分配系液液平衡と加水分解酵素の分配係数を良好に相関できた。疎水クロマトグラフィー(HIC)により、アミノ酸・タンパク質の表面疎水性の測定を試みた。TSKgel Butyl-NPRカラムを使用し、まず分配係数を測定した3種類の加水分解酵素の測定を行った。塩濃度などの溶出条件を調整することにより3種類の酵素の溶出時間に差が見られ、クロマトグラフィーの溶出時間によって表面疎水性を評価できる可能性が示された。今後、測定条件の詳細な検討や、相互作用パラメータとの関係を検討する必要があると考えられる。

The separation and purification method and the aqueous two-phase partition method have attracted much attention. In the design of aqueous two-phase partition method, the partition coefficient of liquid-liquid equilibrium of aqueous two-phase partition system is very important The liquid-liquid equilibrium of aqueous two-phase partition system was measured by DEX T500,Mn=170300,Mw/Mn=2.95 and PEG20000,Mn=17100,Mw/Mn=1.16. The liquid-liquid equilibrium of the system is important, and the molecular weight distribution of the upper and lower phases after phase separation is determined. Determination of molecular weight distribution at 20℃The molecular weight distribution was determined and the molecular weight distribution was confirmed. The partition coefficient of the aqueous two-phase partition system described above was determined at 20℃. The partition coefficient is similar to that of the enzyme. The interaction term is used to determine the molecular weight dependence of the molecule. The molecular weight distribution of DEX is approximated by thermodynamic methods and calculated by phase equilibrium. Interaction optimization, aqueous two-phase partition system, liquid-liquid equilibrium, partition coefficient of hydrolytic enzymes, good correlation The determination of surface moisture content of water in the sample was carried out. The TSKgel Butyl-NPR system was used to determine the partition coefficient of three kinds of hydrolytic enzymes. The possibility of adjusting the dissolution time of the three enzymes by adjusting the concentration and dissolution conditions is shown. In the future, the measurement conditions are discussed in detail, and the interaction is discussed in detail.