線虫におけるペプチド性神経伝達物質の検索

寻找秀丽隐杆线虫中的肽神经递质

• 批准号: 05858109
• 负责人: 黒川 清
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05858109/
• 关键词: 線虫; オキシトシン; サブスタンスP; in situハイブリゼーション; 免疫組織化学

線虫における種々の神経ペプタイドの存在を免疫組織化学の手法を用いてスクリーニングした。オキシトシン、サブスタンスPに対する抗体に対して陽性を示す細胞が存在することを見いだした。このうちまず最初に、比較生物学的に解析の進んでいるオキシトシン類似物質についての解析を進めた。ラット・オキシトシン遺伝子をプローブとして線虫染色体DNAをサザンブロット解析したところ、ラット・オキシトシンと高度に相同する遺伝子を確認した。その後、このオキシトシン類似物質の遺伝子の遺伝子座を決定するために、まず英国MRC研究所のDr.Alan Coulsonより供与されたYACフィルターを用いたマッピングを行ったところ、この遺伝子座は第一染色体セントロメア近傍に存在することを確認した。現在、さらに精細な解析を行っている途中である。また、神経ペプタイドの発現をmRNAレベルで分析するために、迅速・簡便な非放射性標識によるin situ hybridization法の開発が必要となったが、これを申請者は新たにPCR法を応用してクローニングする必要のないcRNAのin vitro合成法を考案し、平成5年度の組織細胞化学会(神戸)において発表した。この方法を用いて線虫におけるオキシトシンの存在をmRNAレベルで検討している。一方、サブスタンスPについては、腹部に存在する大型のニューロンのみが免疫学的に陽性を示すことを見いだし、このニューロンの同定を試みたが、光学顕微鏡レベルの観察では不可能であるので、さらに電子顕微鏡による微細な構造解析と共焦点顕微鏡による3次元的解析を現在続行中である。

Nematodes に お け る kind 々 の god 経 ペ プ タ イ ド の is を immunohistochemical の gimmick を with い て ス ク リ ー ニ ン グ し た. オ キ シ ト シ ン, サ ブ ス タ ン ス P に す seaborne る antibody に し seaborne て positive を す cells exist が す る こ と を see い だ し た. こ の う ち ま ず に initial analytical の into ん, comparative biology に で い る オ キ シ ト シ ン similar material に つ い て の parsing を into め た. ラ ッ ト · オ キ シ ト シ ン posthumous son 伝 を プ ロ ー ブ と し て nematodes chromosome DNA を サ ザ ン ブ ロ ッ ト parsing し た と こ ろ, ラ ッ ト · オ キ シ ト シ ン と highly に same す る heritage 伝 son を confirm し た. After そ の, こ の オ キ シ ト シ ン similar material の heritage 伝 son の heritage 伝 stroma を decided す る た め に, ま ず institute of the MRC の Dr. Alan Coulson よ り さ and supply れ た YAC フ ィ ル タ ー を with い た マ ッ ピ ン グ を line っ た と こ ろ, こ の heritage 伝 stroma は first chromosome セ ン ト ロ メ ア nearly exist alongside に す る こ と を confirm し た. Now, さらに fine-grained な parses を line って る る in である. ま た, god 経 ペ プ タ イ ド の 発 now を mRNA レ ベ ル analysis で す る た め に, rapid, simple な non-radioactive logo に よ る the in situ hybridization method の open 発 が necessary と な っ た が, こ れ を applicants は new た に PCR method を 応 with し て ク ロ ー ニ ン グ す る necessary の な い cRNA の in The in synthesis method を research case にお, the 5th year of Heisei, the にお て て of the histological cell chemistry society (Kobe), issued a table た. こ の way を with い て nematodes に お け る オ キ シ ト シ ン の is を mRNA レ ベ ル で beg し 検 て い る. Side, サ ブ ス タ ン ス P に つ い て は exist, abdomen に す る large の ニ ュ ー ロ ン の み が immunology に positive を shown す こ と を see い だ し, こ の ニ ュ ー ロ ン の with fixed を try み た が, optical 顕 micromirror レ ベ ル の 観 examine で は impossible で あ る の で, さ ら に electronic 顕 micromirror に よ る imperceptible な structure と total focus 顕 micromirror に よ る 3 times The resolution of the element を is now in the 続 line である.

项目成果

Yamada H,Kurokawa K,Ochi J: "Histochemical studies on‘neurosteroids':distribution of cytochrome P450 aromatase in the rat brain." Elsevier, (1991)

Yamada H、Kurokawa K、Ochi J：“‘神经类固醇’的组织化学研究：细胞色素 P450 芳香酶在大鼠大脑中的分布，Elsevier，(1991)

Nishimura T,et al.: "Atrial natriuretic polypeptide(ANP)-immunoreactive and specific atrial granules in cardiac myocytes of stroke prone spontaneously hypertensive rat(SHRSP)." Arch.Histol.Cytol.57. 1-7 (1994)

Nishimura T 等人：“心房钠尿多肽 (ANP) - 易发生中风的自发性高血压大鼠 (SHRSP) 心肌细胞中的免疫反应性和特异性心房颗粒。”

黒川清 山田久夫: "DNA診断 -X染色体を中心に-" 小児内科. 24. 792-796 (1992)

Kiyoshi Kurokawa 和 Hisao Yamada：“DNA 诊断 - 聚焦 X 染色体 -” 儿科内科医学。 24. 792-796 (1992)

黒川清 山田久夫: "性決定機構の遺伝的背景" 小児内科. 24. 789-791 (1992)

Kiyoshi Kurokawa 和 Hisao Yamada：“性别决定机制的遗传背景”小儿内科 24. 789-791 (1992)。

Kurokawa K, Yamada H Ochi J: "Non-radiolabeled in situ hybridization and immunohistochemistry of alpha -smooth muscle actin in myoepithelial cells." Acta histochem.Cytochem.25. 199-204 (1992)

Kurokawa K、Yamada H Ochi J：“肌上皮细胞中α-平滑肌肌动蛋白的非放射性原位杂交和免疫组织化学。”