抗肝細胞自己抗体の化学発光免疫測定法の開発

抗肝细胞自身抗体化学发光免疫分析方法的建立

• 批准号: 06557147
• 负责人: 網野 信行
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06557147/
• 关键词: 自己免疫性肝炎; 出産後発症; 抗肝細胞抗体; P450 2D6; ELISA

平成6年度は、チトクロームP450 2D6を抗原として用いた自己抗体測定法に開発をてがけ、現在進行中である。シトクロームP450 2D6は、II型自己免疫性肝炎患者の血中にみられる肝腎ミクロソーム抗体・LKM-1が認識する抗原の本体であることが近年証明され注目されている肝の解毒にかかわる酵素である。LKM-1抗体の抗体陽性率は本邦では必ずしも高くないが、これは一つにはLKM-1抗体の測定が間接蛍光法によっているため感度が低いことに起因すと考えられ、抗原本体であるP450 2D6をもちいた特異的な高感度自己抗体測定法の開発が待たれている。そこで我々は、酵母に発現させたヒト組換えP450 2D6(およびLKM-2抗体の抗原と考えられるP450 2C9)を抗原として、まずConventionalなELISA系を開発して、その臨床的な有用性を評価することとした。具体的にはヒト組換えP450 2D6(2C9)を発現した酵母のミクロソーム分画にはこの蛋白が多く含まれるので、これをELISAプレートに固相化し、被検血清を作用させ、2次抗体としてペルオキシダーゼ標識ウサギ抗ヒトIgG抗体をもちいて発色させる系である。現在までに、系の一応のセットアップを終え、健常人血清、肝炎他の肝疾患患者血清もちいて、系の基礎検討をおこなっていたが、酵母のミクロソーム分画をもちいたのでは、酵母蛋白や膜成分の夾雑物により偽陽性率が高くなる結果となったので、抗原を精製してもちいるELISA系に変更して、系を設定しつつある。

In 2006, the P450 2D6 antigen assay was developed and is currently in progress. P450 2D6, LKM-1, LKM-1, LKM The positive rate of antibody against LKM-1 is higher than that of the present country. However, the detection of LKM-1 antibody by indirect fluorescence method is lower than that by indirect fluorescence method. The detection of antigen itself is higher than that by P450 2D6. The detection of LKM-1 antibody by indirect fluorescence method is pending. P450 2D6 (LKM-2 antibody antigen) was developed and evaluated for its clinical usefulness. The specific protein sequence P450 2D6 (2C9) was detected in yeast and its protein content was increased. ELISA was used to immobilize the protein, to react with the serum, to identify the secondary antibody, and to identify the anti-IgG antibody. Now, there is a series of ELISA tests, healthy human serum, hepatitis and other liver disease patients serum, basic test of the system, yeast protein and membrane components, false positive rate of yeast protein and membrane components, high results, antigen purification, ELISA system, system setting.

项目成果

Hidaka Y,Tamaki H,Iwatani Y,Tada H,Mitsuda N,Amino N: "Prediction of postpartum Graves' thyrotoxicosis by measurement of thyroid stimulating antibody in early pregnancy." Clin Endocrinol. 41. 15-20 (1994)

Hidaka Y，Tamaki H，Iwatani Y，Tada H，Mitsuda N，Amino N：“通过妊娠早期甲状腺刺激抗体的测量来预测产后格雷夫斯甲状腺毒症。”

Hidaka Y,Nishi I,Tamaki H,Takeoka K,Tada H,Mitsuda N,Amino N: "Differentiation of postpartum thyrotoxicosis by serum thyroglobulin;Usefulness of the new multi-stie immunoradiometric assay." Thyroid. 4. 275-278 (1994)

Hidaka Y、Nishi I、Tamaki H、Takeoka K、Tada H、Mitsuda N、Amino N：“通过血清甲状腺球蛋白区分产后甲状腺毒症；新的多重免疫放射测定法的用途。”

Amino N,Tada H: "Autoimmune thyroid disease/Thyroiditis(Chapter43)" De Groot LJ ed,Endocrinology,3rd edition,W.B.Saunders Company,Philadelphia, 726-741 (1995)

Amino N，Tada H：“自身免疫性甲状腺疾病/甲状腺炎（第 43 章）” De Groot LJ 编辑，内分泌学，第 3 版，W.B.Saunders Company，费城，726-741 (1995)

Tada H,Hidaka Y,Itoh E,Kashiwai T,Tamaki H,Iwatani Y,Amino N: "Prevalence of postpartum onset of disease within patients with Graves′disease of child‐bearing age." Endocrine J. 41. 325-327 (1994)

Tada H、Hidaka Y、Itoh E、Kashiwai T、Tamaki H、Iwatani Y、Amino N：“育龄格雷夫斯病患者产后发病的患病率，内分泌 J. 41. 325-327” 1994）

Tamaki H,Kaino M,Endo Y,Moriyama T,,Nakajima T Imagawa Y,Amino N: "Enzyme-linked immunosorbent assay for TSH receptor antibodies using the synthetic TSH receptor peptides." J Clin Lab Immunol. 43. 89-98 (1994)

Tamaki H,Kaino M,Endo Y,Moriyama T,,Nakajima T Imakawa Y,Amino N：“使用合成 TSH 受体肽对 TSH 受体抗体进行酶联免疫吸附测定。”