抗肝細胞自己抗体の化学発光免疫測定法の開発

抗肝细胞自身抗体化学发光免疫分析方法的建立

基本信息

批准号：
06557147
负责人：
網野信行
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06557147/
关键词：
自己免疫性肝炎出産後発症抗肝細胞抗体 P450 2D6 ELISA

项目摘要

平成6年度は、チトクロームP450 2D6を抗原として用いた自己抗体測定法に開発をてがけ、現在進行中である。シトクロームP450 2D6は、II型自己免疫性肝炎患者の血中にみられる肝腎ミクロソーム抗体・LKM-1が認識する抗原の本体であることが近年証明され注目されている肝の解毒にかかわる酵素である。LKM-1抗体の抗体陽性率は本邦では必ずしも高くないが、これは一つにはLKM-1抗体の測定が間接蛍光法によっているため感度が低いことに起因すと考えられ、抗原本体であるP450 2D6をもちいた特異的な高感度自己抗体測定法の開発が待たれている。そこで我々は、酵母に発現させたヒト組換えP450 2D6(およびLKM-2抗体の抗原と考えられるP450 2C9)を抗原として、まずConventionalなELISA系を開発して、その臨床的な有用性を評価することとした。具体的にはヒト組換えP450 2D6(2C9)を発現した酵母のミクロソーム分画にはこの蛋白が多く含まれるので、これをELISAプレートに固相化し、被検血清を作用させ、2次抗体としてペルオキシダーゼ標識ウサギ抗ヒトIgG抗体をもちいて発色させる系である。現在までに、系の一応のセットアップを終え、健常人血清、肝炎他の肝疾患患者血清もちいて、系の基礎検討をおこなっていたが、酵母のミクロソーム分画をもちいたのでは、酵母蛋白や膜成分の夾雑物により偽陽性率が高くなる結果となったので、抗原を精製してもちいるELISA系に変更して、系を設定しつつある。

1994年，我们使用细胞色素P450 2d6作为抗原开发了一种自身抗体测定法，目前正在进行中。细胞色素P450 2d6是一种参与肝排毒的酶，最近已证明是LKM-1识别的抗原的主体，LKM-1是一种肝烯醇微粒体抗体，在II型自身免疫性肝炎患者的血液中发现，并引起了人们的注意。在日本，LKM-1抗体的抗体阳性速率不一定很高，但这部分是由于通过间接荧光测量LKM-1抗体的敏感性低，并且使用抗原本身的特定，高度敏感的自身抗体测定的开发，P450 2D6，等待。因此，我们首先使用人类重组P450 2D6（和P450 2C9，被认为是LKM-2抗体的抗原）开发了一种常规的ELISA系统，并评估了其临床效用。 Specifically, since the microsomal fraction of yeast expressing human recombinant P450 2D6 (2C9) contains a large amount of this protein, it is a system in which it is immobilized on an ELISA plate, and the serum to be tested is applied, and the color is developed using a peroxidase-labeled rabbit anti-human IgG antibody as a secondary antibody.迄今为止，我们已经完成了系统的设置，并通过使用健康人员的血清和肝炎和其他肝病患者的血清进行了基础研究，但是如果我们使用酵母的微粒体分数，则假阳性率很高，因此由于Yeast Proteins and Membrane成分的污染物而变化，因此可以更换系统，因此可以更换系统。