インスリンによるGLUT4のtranslocationにおけるMAPキナーゼの機能の解析

MAP激酶在胰岛素诱导的GLUT4易位中的功能分析

• 批准号: 06770806
• 负责人: 井上 元
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770806/
• 关键词: インスリン; 3T3-L1脂肪細胞; MAPキナーゼ; 糖輸送担体; 低分子量GTP結合蛋白

本研究はGLUT4-containing vesiclesに存在するMAP kinaseの基質を同定し、それらのインスリンによるGLUT4のtrans locationで果たす役割及びその調節機構を解明することを目的とした。特に、exocytosisに関与するとされる低分子量GTP結合蛋白、Rab3Dの、MAP KinaseやGLUT4-containing vesiclesとの関係について検討した。3T3-L1脂肪細胞では、抗Rab3D抗体によるimmunoblottingにて25及び28kDaの蛋白を特異的に認識した。細胞膜分画では28kDaの、細胞内膜分画では25及び28kDaの、細胞質では25kDaの蛋白が検出されたが、どの分画でもインスリンによる量の変化は検出されなかった。GLUT4-containing vesiclesではRab3Dは検出できなかった。この抗体はGTP結合能を持つ28kDaの蛋白を免疫沈降するが、この蛋白はin vitroでMAP kinaseにより酸化された。しかし、^<32>P正リン酸で細胞ラベルして行った検討では、インスリン非刺激でもRab3Dはリン酸化されており、シンスリンによるリン酸化状態の変化は検出できず、さらに、3T3-L1脂肪細胞をインスリン処理して脱リン酸化を阻害する条件で抗Rab3D抗体による免疫沈降を行い、in vitroでMAP kinaseによる免疫沈降物のリン酸化を検討したが、28kDaの蛋白のMAP Kinaseによるリン酸化の程度には差異は見られなかった。以上より、1、インスリンによりその局在は変化しない。2、Rab3Dは、細胞内peoolのGLUT4-containing vesicleには少なくとも強固には会合しない。3、Rab3Dは、in vitroではMAP kinaseの基質となるが、in vivoではインスリンによりそのリン酸化状態は大きくは変化しない、と考えられた。現在、構成的活性化を受けたMAP kinase kinaseをレトロウィルスベクターを用いて3T3-L1脂肪細胞に導入し、糖輸送におけるMAP kinaseの役割を検討中である。

This study は GLUT4 - containing vesicles に exist す る MAP kinase を の matrix with し, そ れ ら の イ ン ス リ ン に よ る GLUT4 の trans location で fruit た す "cut and び そ の regulator を interpret す る こ と を purpose と し た. The に, exocytosisに is related to the するとされる low molecular weight gTP-binding protein, Rab3D <s:1>, MAP KinaseやGLUT4-containing vesiclesと <e:1> and に, て検, て検, て検, て検 and て検 are used to discuss the た. 3T3-L1 adipocyte で た, anti-rab3d antibody によるimmunoblottingにて25 and び28kDa <s:1> protein を specific に recognition た. 28 kda membrane points draw で は の, cells lining points で は び 28 and 25 kda の, cytoplasmic で は 25 kda protein の が 検 out さ れ た が, ど の points draw で も イ ン ス リ ン に よ る quantity の variations change は 検 out さ れ な か っ た. GLUT4-containing vesiclesで で Rab3D 検 検 out of で な な った った った. こ の antibody は GTP binding energy made を hold つ 28 kda protein の を immune sink す る が, こ は の protein in vitro で MAP kinase に よ り acidification さ れ た. し か し, ^ < > 32 P is リ ン acid で cell ラ ベ ル し て line っ た beg で 検 は, イ ン ス リ ン not stimulate で も Rab3D は リ ン acidification さ れ て お り, シ ン ス リ ン に よ る リ ン acidification condition の variations change は 検 out で き ず, さ ら に, 3 t3 L1 fat cells を イ ン ス リ ン 処 Richard し て リ off ン acidification を resistance against す る conditions で Ra B3D antibody に よ る immune sink を い, the in vitro で MAP kinase に よ る immune sink content の リ ン acidification を beg し 検 た が, 28 kda protein の の MAP kinase に よ る リ ン acidification の degree に は differences は see ら れ な か っ た. The above よ よ, 1, and <s:1> スリ スリ によ によ そ そ are all in the process of <s:1> change な な. 2. Rab3D に, intracellular peool glut-glut4-containing vesicleに に, less なくと <s:1>, <s:1>, strong に, に, rendezvous な な に. 3, Rab3D は, the in vitro で は MAP kinase の matrix と な る が, the in vivo で は イ ン ス リ ン に よ り そ の リ ン acidification condition は big き く は variations change し な い と exam え ら れ た. Now, constitute the activeness を け た MAP kinase kinase を レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を with い て 3 t3 - L1 fat cells に import し, sugar conveying に お け る MAP kinase の service cut を 検 beg in で あ る.

项目成果

Shigeo Kono: "A Novel Substrate for Insulin-Sensitive Serine/Threonine Kinase in Intact Cells" Endocrinology. 135. 1529-1536 (1994)

Shigeo Kono：“完整细胞中胰岛素敏感丝氨酸/苏氨酸激酶的新型底物”内分泌学。

Gen Inoue: "Effects of ML-9 on Insulin Stimulation of Glucose Transport in 3T3-L1 Adipocytes" J.Biol.Chem.268. 5272-5278 (1993)

Gen Inoue：“ML-9 对 3T3-L1 脂肪细胞中葡萄糖转运的胰岛素刺激的影响”J.Biol.Chem.268。