肝におけるアポBの分泌調節機序・HepG2細胞におけるアポB分解酵素の分離、精製

肝脏apoB分泌的调控机制/HepG2细胞apoB降解酶的分离纯化

• 批准号: 06770816
• 负责人: 古川 誠一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770816/
• 关键词: HepG2 細胞; トリグリセライド; アポB

Eicosapentaenoic acid(EPA)はオレイン酸(OA)と同様にHepG2細胞でapoB分泌を増加させる機序を解明し、また、漢方薬である大柴胡湯、柴胡加竜骨牡蠣湯のin vivoで見られる抗脂血作用をHepG2細胞を用いて検討した。細胞内のTG、CEの合成はcontrol(C),0.4mM、0.8mMのOAまたはEPAの各溶液あるいは、0.5から5.0mg/mlの濃度の大柴胡湯(TJ-8)、柴胡加竜骨牡蠣湯(TJ-12)の溶液を作り、2ないし24時間培養し脂質を測定した。ApoBの分泌は免疫沈降法およびELISA法を用いた。細胞内のTGの合成はCに比べOAとEPAで5倍に増加した。細胞内のCE合成は、OAではCと同様だが、EPAはCに比べ約50%有意に低下させた。TJ-8、TJ-12の細胞内の脂質の合成は0.5mg/mlの濃度で各々Cの約50%に低下した。ApoBの分泌はOAとEPAともCに比べ約3倍増加した。TJ-8、TJ-12のapoBの分泌は両者とも2.0mg/mlの濃度ではCに比べ有意差はなかったが、5.0mg/mlの濃度で有意に抑制した。Pulsechase実験ではapoBの合成量はC,OA,EPAとも有意差はなかったが、細胞内分解は有意に抑制された。OAとEPAはCに比べ細胞内のTG生合成を増大させたが、EPAは細胞内CEの生合成を減少させた。OAとEPAともapoBの細胞内分解を抑制することによりapoBの分泌を亢進させた。細胞内のTG合成亢進はapoBの分泌促進に重要であり、CEはapoBの分泌調節に関与していないことが示唆された。一方、TJ-8、TJ-12は低濃度においてもTG、CEの合成を抑制したが、apoBの分泌を抑制するには、より高濃度でTJ-8、TJ-12を添加する必要があることが判明した。

Eicosapentaenoic acid(EPA) is a potent antilipemic acid (OA) and its mechanism for increasing apoB secretion in HepG2 cells is discussed. The synthesis of TG and CE in cells was controlled (C), 0.4 mM, 0.8 mM OA and EPA solutions were incubated for 2 to 24 hours in Dachaihu Decoction (TJ-8) and Chaihu Jialonggu Oyster Decoction (TJ-12) at concentrations of 0.5 to 5.0 mg/ml. ApoB secretion by ELISA The synthesis of TG in cells was 5-fold higher than that of EPA. CE, OA and EPA synthesis in cells are intentionally lower than those in cells by about 50%. The lipid synthesis in TJ-8 and TJ-12 cells decreased by about 50% at 0.5 mg/ml. ApoB secretion is about 3 times higher than EPA secretion. The apoB secretion of TJ-8 and TJ-12 was inhibited at concentrations of 2.0 mg/ml and 5.0 mg/ml, respectively. Pulsechase is a synthetic protein that is intentionally inhibited by C,OA and EPA. OA and EPA increased TG and CE production in cells compared with control. OA and apoB intracellular breakdown are inhibited and apoB secretion is increased. The increase of TG synthesis in cells is important for apoB secretion promotion, and CE is important for apoB secretion regulation. It was found that TJ-8 and TJ-12 inhibited the synthesis of TG and CE at low concentrations and inhibited apoB secretion at high concentrations.

项目成果

古川誠一,平野勉,永野聖司: "大柴胡湯,柴胡加竜骨牡蠣湯のヒト肝培養細胞(HepG2細胞)における抗脂血作用" 和漢医薬学会誌. 11巻3号(in press). (1994)

Seiichi Furukawa、Tsutomu Hirano、Seiji Nagano：“Dasaikoto 和 Saikokaryukotsukakito 对培养的人肝细胞（HepG2 细胞）的抗脂血症作用”日本中华医学会杂志第 11 卷，第 3 期（出版中）。

M.Kurokawa,T.Hirano,S.Furukawa,S.Nagano,M.Adachi: "Simular to clcic acid,eicosapenfaenooc acid stimulates apolipoprotein B secretion loy inhibiting its intraullular digralation in HepG2 clles." Atherosclcrosis. (in press). (1994)

M.Kurokawa、T.Hirano、S.Furukawa、S.Nagano、M.Adachi：“与氯酸类似，二十碳五烯酸可刺激载脂蛋白 B 分泌，并抑制其在 HepG2 细胞中的胞内二聚。”