肝におけるアポBの分泌調節機序・HepG2細胞におけるアポB分解酵素の分離、精製

肝脏apoB分泌的调控机制/HepG2细胞apoB降解酶的分离纯化

基本信息

批准号：
06770816
负责人：
古川誠一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770816/
关键词：
HepG2 細胞トリグリセライドアポB

项目摘要

Eicosapentaenoic acid(EPA)はオレイン酸(OA)と同様にHepG2細胞でapoB分泌を増加させる機序を解明し、また、漢方薬である大柴胡湯、柴胡加竜骨牡蠣湯のin vivoで見られる抗脂血作用をHepG2細胞を用いて検討した。細胞内のTG、CEの合成はcontrol(C),0.4mM、0.8mMのOAまたはEPAの各溶液あるいは、0.5から5.0mg/mlの濃度の大柴胡湯(TJ-8)、柴胡加竜骨牡蠣湯(TJ-12)の溶液を作り、2ないし24時間培養し脂質を測定した。ApoBの分泌は免疫沈降法およびELISA法を用いた。細胞内のTGの合成はCに比べOAとEPAで5倍に増加した。細胞内のCE合成は、OAではCと同様だが、EPAはCに比べ約50%有意に低下させた。TJ-8、TJ-12の細胞内の脂質の合成は0.5mg/mlの濃度で各々Cの約50%に低下した。ApoBの分泌はOAとEPAともCに比べ約3倍増加した。TJ-8、TJ-12のapoBの分泌は両者とも2.0mg/mlの濃度ではCに比べ有意差はなかったが、5.0mg/mlの濃度で有意に抑制した。Pulsechase実験ではapoBの合成量はC,OA,EPAとも有意差はなかったが、細胞内分解は有意に抑制された。OAとEPAはCに比べ細胞内のTG生合成を増大させたが、EPAは細胞内CEの生合成を減少させた。OAとEPAともapoBの細胞内分解を抑制することによりapoBの分泌を亢進させた。細胞内のTG合成亢進はapoBの分泌促進に重要であり、CEはapoBの分泌調節に関与していないことが示唆された。一方、TJ-8、TJ-12は低濃度においてもTG、CEの合成を抑制したが、apoBの分泌を抑制するには、より高濃度でTJ-8、TJ-12を添加する必要があることが判明した。

类似于油酸（OA）类似的eicosapentaenoic酸（EPA）揭示了HEPG2细胞增加APOB分泌的机制，还检查了中草药Daisaikoto和Shiko Karyuko Oysterto的体内抗脂质血症的作用。通过控制（C），0.4 mM，0.8 mm OA或EPA溶液或DA-Saikoto（TJ-8）或0.5至5.5 mg/ml 0.5至5.5至5.0 mg/ml的TG和CE的浓度来合成细胞内TG和CE。使用免疫沉淀和ELISA进行APOB的分泌。与细胞内CE合成相比，OA和EPA的细胞内TG合成增加了5倍，与OA中的C的C.相似，但与C的细胞内脂质合成的TJ-8和TJ-12相比，EPA显着降低了约50％，TJ-8和TJ-12的细胞内脂质合成降低了C的浓度为0.5 mg/ml的C浓度约50％。与OA和EPA中的C相比，APOB的分泌增加了约三倍。与C相比，在2.0 mg/mL的浓度下，TJ-8和TJ-12中APOB的分泌没有显着差异，但在5.0 mg/ml的浓度下被显着抑制。在Pulsechase实验中，C，OA和EPA的APOB合成量没有显着差异，但是细胞内降解得到了显着抑制。与C相比，OA和EPA增加了细胞内TG生物合成，而EPA降低了细胞内CE生物合成。 OA和EPA都通过抑制APOB的细胞内降解来增加APOB的分泌。细胞内TG合成对于促进APOB分泌很重要，表明CE不参与调节APOB分泌。另一方面，TJ-8和TJ-12甚至在低浓度下抑制了TG和CE的合成，但是发现为了抑制APOB的分泌，必须以较高的浓度添加APOB的分泌。