白血病細胞のG-CSFに対する反応性とG-CSF受容体の構造異常に関する研究

白血病细胞G-CSF反应性及G-CSF受体结构异常的研究

• 批准号: 06770855
• 负责人: 上野 博則
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770855/
• 关键词: 顆粒球コロニー刺激因子; G-CSF受容体; 急性白血病; 骨髄異形成症候群; 突然変異

本年度は新鮮白血病細胞のG-CSFに対する反応性を、細胞の増殖応答性・^3H-Thymidineの取り込みを用いて解析し、G-CSF受容体の発現をフローサイトメトリー法によって解析した。また同時に、それらの細胞と当研究室で保存した白血病細胞からDNAを抽出し、PCR-SSCP法でG-CSF受容体遺伝子の細胞内領域の突然変異について検討した。G-CSF反応性およびG-CSF受容体発現の解析では、10例について検討を行ったが、受容体発現量とG-CSF反応性に差異がある症例は認められなかった。また、急性白血病および骨髄異形成症候群(MDS)患者30例の骨髄単核球からDNAを分離し、G-CSF受容体遺伝子の細胞内領域(exon16およびexon17)についてPCR-SSCP法による突然変異の解析を行ったところ、急性骨髄性白血病3例、MDS2例において異常バンドを検出し、G-CSF受容体遺伝子のexon17領域の変異が予想された。現在異常バンドを検出した5例において、exon17をPCRで増幅し塩基配列を解析している。今後は、上記の実験から明らかにされた突然変異をsite-directed mutagenesis法により人工的に作成し、各種増殖因子依存性白血病細胞株(TF-1,UT-7,Ba/F3など)に導入、細胞増殖能や分化誘導能の変化を観察するとともに、G-CSF刺激時の細胞内チロシンリン酸化パターンの違いを野性型G-CSF受容体遺伝子導入細胞と比較する予定である。また正常人や各種白血病細胞株においても同様の解析を行い、G-CSF受容体遺伝子のpolymorphismや白血病細胞株における変異G-CSF受容体遺伝子の役割についても検討を加える予定である。

This year, the G-CSF response to fresh leukemia cells, the proliferation response of cells, the use of H-Thymidine, the development of G-CSF receptors, and the analysis of H-Thymidine. DNA extraction of leukemic cells and detection of sudden changes in intracellular domains of G-CSF receptor genes by PCR-SSCP were performed simultaneously and simultaneously in cells preserved in the laboratory. G-CSF reactivity and G-CSF receptor occurrence were analyzed in 10 cases, and the differences in receptor occurrence and G-CSF reactivity were identified. DNA isolation from bone marrow in 30 patients with acute leukemia and osteogenesis syndrome (MDS), analysis of sudden changes in G-CSF receptor gene in the intracellular domain (exon16 and exon17) by PCR-SSCP, detection of abnormal bone marrow in 3 patients with acute leukemia and 2 patients with MDS, and analysis of G-CSF receptor gene in exon17 domain were discussed. Now the exception is detected in 5 cases, exon17 in PCR amplification and analysis of base alignment. In the future, we will continue to record the rapid development of site-directed mutagenesis, the introduction of various growth factor-dependent leukemia cell lines (TF-1,UT-7,Ba/F3), the detection of cell proliferation and differentiation induction, and the comparison of the identification of wild G-CSF receptor gene introduced into cells. The analysis of G-CSF receptor gene polymorphism and leukemia cell lines was performed in normal individuals and various leukemia cell lines. The analysis of G-CSF receptor gene polymorphism and leukemia cell lines was performed differently.