权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

血小板インテグリンα_<11b>β_3の機能ドメインの同定-ヒト/マウスキメラインテグリンを用いたモノクローナル抗体のエピトープマップによる解析-

血小板整合素α_<11b>β_3功能域的鉴定 - 使用人/小鼠嵌合整合素进行单克隆抗体表位作图分析 -

基本信息

批准号：
06770861
负责人：
片桐康博
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770861/
关键词：
血小板インテグリン α_<11b>β_3 機能ドメイン

项目摘要

α_<11b>β_3インテグリンの機能ドメインの同定をモノクローナル抗体のエピトープマップによって行った。1、ヒト/マウスキメラα_<11b>の作製--B57BL/6マウス血小板よりα_<11b>cDNAを得た。ヒトα_<11b>とはアミノ酸レベルで約90%の相同性が認められた。このcDNAをもとにヒト/マウスキメラα_<11b>cDNAを作製し、ヒトβ_3cDNAとともにトランスフェクションによってCOS,293細胞に発現させた。2、モノクローナル抗体のエピトープマップ--マウス由来の抗原に対してマウス抗体が反応しないことを利用し、フローサイトメーターにてCOS・293細胞に発現させたキメラインテグリンとの反応性を調べた。α_<11b>β_3の複合体を認識し、リガンド結合を阻害するモノクローナル抗体(P2,2G12,4F10)は、α_<11b>N末端部(♯2-210)に反応することがわかった。従来より、α_<11b>上の2番目のEF hand構造(♯294-312)がリガンド結合部位といわれてきたが、それよりははるかにN末端側が重要であることが判明した。3、ヒトα_<11b>フラグメントによるエピトープマップ--ヒトα_<11b>フラグメントを大腸菌に発現させ、ウェスタンブロットによって抗α_<11b>抗体の認識部位を決定した。EDTA処理α_<11b>β_3のみを特異的認識する抗体(PMI-1,D33C,2J99)の多くは、α_<11b>H鎖C末端部位を認識する。このことは、EDTA処理によるα_<11b>β_3の立体構造の変化がこの部位で生じていることを示唆する。

α_<11b>β_3-D_3-D_3-D_3- 1, <11b>B57BL/6 α_<11b>cDNA About <11b>90% of the identity of the two groups is identical. This cDNA <11b>is produced by the gene encoding β_3 cDNA and the gene encoding COS,293 cells. 2. Antibodies are produced in COS·293 cells and are regulated by antigen-derived proteins. The α_<11b>β_3 complex is recognized, and the binding is blocked by antibodies (P2, 2G12, 4F10) and α_<11b>N terminal (P2 -210). The <11b>EF hand structure (294-312) of the two branches of the α_upper part of the α_upper part of the α_ 3. α<11b>_<11b>α<11b>_ EDTA-treated α_<11b>β_3 was specifically recognized by antibodies (PMI-1, D33C, 2J99), and <11b>the C-terminal region of α_ H lock was recognized. The <11b>three-dimensional structure of α_ β_3 was transformed by EDTA treatment.