ラット腎尿細管基底膜側細胞膜(BLM)GTP結合蛋白質に及ぼすループ利尿剤の効果

袢利尿剂对大鼠肾小管基底膜 (BLM) GTP 结合蛋白的影响

• 批准号: 06770888
• 负责人: 筬島 明彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770888/
• 关键词: ループ利尿剤; cAMP; AVP; 腎尿細管基底膜側細胞膜

[目的]ループ利尿剤の作用機序は、腎尿細管ヘンレ係蹄上行脚の管腔側Na^+K^+2Cl^-cotransportの抑制であるが、抗ADH作用による利尿効果も報告されている。我々は、既にラット腎尿細管基底膜側細胞膜(BLM)を用いた研究で、Furosemide(Fur)、Ethacrynic acid(EA)、Azosemide(Azo)のループ利尿剤は、AVP受容体のみならず、受容体以降にも直接作用する可能性を報告した(Japanese Journal of Nephrology,34,965,1992)。そこで今回、Forskolin,GTP-γS,コレラ毒素を用いてG蛋白及びadenylate cyclaseに及ぼす直接効果を検討した。[方法]以下の検討を行った。(1)単離したBLMにおける、GTP-γS,ForskolinのcAMP産生に及ぼす効果(2)Forskolin,GTP-γS刺激下cAMPに及ぼす三者ループ利尿剤の抑制効果(3)活性したコレラ毒素とBLMをNADを基質としたmixtureで反応させ、ADP-ribosylationしたBLMのcAMP産生に及ぼす効果(4)(3)のコレラ毒素刺激下cAMPに及ぼす三者ループ利尿剤の抑制効果[結果](1)GTP-γSは濃度依存性にcAMPを増加させ、10^<-6>Mでplateauに達した。最大約16倍に増加し、GTP-γSのEC_<50>値は10^<-7>Mであった。Forskolinは濃度依存性にcAMPを増加したが、plateauに達せず10^<-5>Mで約4倍、10^<-4>にて約9倍の増加を認めた。(2)GTP-γS刺激下cAMPを、EAとAzoは10^<-4>Mにて、またFurは10^<-3>Mにて有意に抑制した。その抑制効果は、Furに比しEAとAzoの方が強力であった。Forskolin刺激下cAMPに対しても同様の効果が得られた。(3)コレラ毒素にてBLMをADP-ribosylationすると、cAMPは約2倍に増加した。(4)コレラ毒素刺激下cAMPを、三者ループ利尿剤は、10^<-3>Mにて有意に抑制した。またその抑制効果は、Furに比しEAとAzoの方が強力であった。[考察]ループ利尿剤(特にEAとAzo)は、ラットBLMにおいて少なくともadenylate cyclaseにも直接作用していることが示唆された。

[objective] to investigate the mechanism of diuretic action, the effect of Na ^ + K ^ + 2Cl^-cotransport on the upper foot of urine tube, the inhibition of diuresis and the effect of anti-ADH on diuresis. We studied the basement membrane (BLM) of urinary tube, Furosemide (Fur), Ethacrynic acid (EA), Azosemide (Azo), AVP receptor, and the possibility of direct action (Japanese Journal of Nephrology,34,965,1992). This time, Forskolin,GTP- γ S was used to treat toxins. G protein and adenylate cyclase were used to treat toxins directly. [method] the following information is available. (1) isolation of BLM fruits, GTP- γ S, Forskolin cAMP fruits and fruits (2) Forskolin GTP- γ S stimulated diuretic inhibition of cAMP and GTP- γ S. (3) activity of antitoxin, BLM, NAD, mixture, ADP-ribosylation, BLM, cAMP and lt [results] (1) GTP- γ S concentration dependence of cAMP, 10 ^ & lt. -6 GTX M