培養軟骨組織による変形性関節症修復の研究-3次元的軟骨細胞培養法による軟骨組織の形成-

利用培养软骨组织修复骨关节炎的研究 - 利用三维软骨细胞培养法形成软骨组织 -

• 批准号: 06771144
• 负责人: 泉 敏弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771144/
• 关键词: 変形性関節症; サイトカイン; 成長因子; 軟骨細胞

関節症関節軟骨における病態進展機序の検討関節症軟骨の破壊進展機序にサイトカインの関与が示されており、ヒト関節症関節軟骨細胞におけるインターロイキン1(IL-1)遺伝子の発現を検討した。さらには関節症における骨軟骨の増殖の機序を検討するために、軟骨細胞増殖作用を持つ塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)の発現を測定した。さらに、bFGFに対するIL-1遺伝子の発現の変化をRT-PCR(Reverse transcription-Polymerase chain reaction)法を用いて検討した。【方法】手術時に採取したヒト関節症関節軟骨あるいはヒト正常関節軟骨より得られた軟骨細胞を培養した。この軟骨細胞にbFGFを加え24時間作用させた。この後total cellular RNAを抽出し、IL-1αあるいはbFGFのprimerを用いてRT-PCR法により発現量を半定量化した。【結果】IL-1α遺伝子の発現は、関節症軟骨細胞においては正常軟骨細胞に比べ増加していた。また、関節症関節軟骨細胞においてはbFGF mRNAの発現も増強していた。さらに、bFGF投与によりIL-1αの遺伝子発現は関節症軟骨細胞において著明に増強した。【考察】関節症関節軟骨細胞においては正常関節軟骨細胞と比較し、IL-1α遺伝子の発現が強く、関節症におけるIL-1の関与を示していると考えられた。また、関節症軟骨細胞においてbFGF mRNAの発現が増強しており関節症における関節破壊への影響が考えられた。さらに、関節症軟骨細胞においては、bFGFに対してIL-1αに関する細胞の反応性が高くなっていることが示唆された。3次元的軟骨細胞培養の試みラット肋軟骨よりコラゲナーゼを用いて軟骨細胞を遊離し、多孔質のスポンジ様の材料に播種することにより三次元的な軟骨細胞の培養を試みた。しかしながら、これまでのところ十分な軟骨基質の産生を得ることができず、ノーザンブロット法により測定したII型コラーゲンの発現量も遊離した直後の軟骨細胞と比べ約10文の1と減少していた。今後さらに様々な培養条件を検討する必要があると考えられる。

Masato knot section masato cartilage に お け る pathological progress machine sequence の 検 for masato knot cartilage の broken 壊 progress machine sequence に サ イ ト カ イ ン の masato and が shown さ れ て お り, ヒ ト masato knot section masato chondrocytes に お け る イ ン タ ー ロ イ キ ン 1 (IL 1) heritage 伝 son の 発 を now beg し 検 た. さ ら に は masato knot に お け る osteochondral の raised colonization の machine sequence を beg す 検 る た め に, cartilage cells raised colonization を つ salt basic line d bud cells raised colonization factor (bFGF) の 発 を determination now し た. Youdaoplaceholder0 and bFGFに exhibit <s:1> transformation をRT-PCR(Reverse transcription-Polymerase chain reaction) against the するIL-1 residue 伝. Youdaoplaceholder5 use を て検 to counteract た. 【 Method 】 During the operation, に was used to take られた chondrocytes を from the lymph node cartilage of the たヒト lymph node disease ある, ヒト ヒト normal lymph node cartilage よ for culture of た た. <s:1> chondrocytes にbFGFを plus え24 time action させた. After <s:1> <s:1>, total cellular RNAを was extracted, and <s:1>, IL-1αある, <s:1>, <s:1>, and bFGF <s:1> primerを were extracted by <s:1> てRT-PCR. The によ <s:1> occurrence amount を was semi-quantified, and た た. 【 Result 】IL-1α offspring 伝 were present, and the number of chondrocytes in arthropathy にお て て normal chondrocytes に increased compared with べ て て た た. ま た section, section masato masato chondrocytes に お い て は bFGF mRNA の 発 も now raised strong し て い た. Youdaoplaceholder0, bFGF administration of によ によ IL-1α progeny 伝 results in に arthropathy chondrocytes にお て て and に enhancement of た. [investigation] masato knot section masato chondrocytes に お い て は normal section masato chondrocytes と compare し, IL - 1 alpha but 伝 の 発 now が く, masato knot に お け る IL - 1 の masato and を shown し て い る と exam え ら れ た. ま た, masato section of chondrocytes に お い て bFGF mRNA の 発 が now raised strong し て お り masato knot に お け る masato section broken 壊 へ の influence が exam え ら れ た. さ ら に, masato section of chondrocytes に お い て は, bFGF に し seaborne て IL - 1 alpha に masato す の る cells against 応 が high く な っ て い る こ と が in stopping さ れ た. Three yuan cartilage cell culture の try み ラ ッ ト rib cartilage よ り コ ラ ゲ ナ ー ゼ を with い て chondrocytes を free し, porous の ス ポ ン ジ others の material に seeding す る こ と に よ り な cartilage cells of the three dimensional の cultivate を try み た. し か し な が ら, こ れ ま で の と こ ろ is の な cartilage matrix result in る を こ と が で き ず, ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り determination し た II コ ラ ー ゲ ン の 発 now quantity も free し た straight after の chondrocytes と than べ about 10 の 1 と reduce し て い た. In the future, the cultivation conditions of さらに, 々な, を検, する, necessary があると and えられる will be examined.

项目成果

志田 純一: "関節軟骨における細胞増殖とBMPの発現について" 日本整形外科学会雑誌. 68. S1287 (1994)

Junichi Shida：“关节软骨中的细胞增殖和 BMP 表达”日本骨科学会杂志 68. S1287 (1994)。

岩城 彰: "ラット大腿骨髄内損傷後の外骨膜における細胞増殖とBMPの発現" 日本整形外科学会雑誌. 68. S1333 (1994)

Akira Iwaki：“大鼠股骨髓内损伤后外部骨膜的细胞增殖和 BMP 表达”日本骨科学会杂志 68. S1333 (1994)。

泉 敏弘: "関節症軟骨細胞におけるIL-1遺伝子の発現およびbFGF投与による影響" 日本整形外科学会雑誌. 68. S1279 (1994)

Toshihiro Izumi：“关节炎软骨细胞中 IL-1 基因的表达和 bFGF 给药的影响”日本骨科学会杂志 68. S1279 (1994)。

神宮司 誠也: "Basic fibroblast grouth factor及びTransforuing groath factor.βの骨折治療過程における細胞増殖制御への関与" 骨折. 16. 5-8 (1994)

Seiya Jinguji：“骨折治疗期间碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子.β参与细胞增殖控制”骨折。