精子の透明体接着蛋白質およびproacrosinの異常についての分子生物学的検討

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1.ヒト精子の透明帯接着蛋白質に関する検討ヒト精子膜上に存在するフコイジン結合蛋白質を、ビオチン化フコイジンを用いたWestern blot法により検出した。求める蛋白質は電気泳動上およそ90Kdの蛋白質であった。その蛋白質をゲルから直接きりだし抽出した後、proteaseによりpeptideに分解した。得られた各peptideについてアミノ酸配列を解析した結果、2つのpeptideの解読が可能であった。それぞれのアミノ酸配列はGlu-Gly-Cys-Gly-Gly(♯1)、Lys-X-Ala-Thr-Tyr-Ala(♯2)であり、data bankからの検討では2つのpeptideを同時に含む蛋白質は存在しなかった。しかし、♯1の配列はintegrine β5の一部アミノ酸配列と一致しており、integrine β5の類似蛋白質の可能性があると考えている。この蛋白質については現在、抗体を作製中である。2.ヒト精子のproacrosinの分子異常に関する検討抗ブタproacrosin抗体と交叉し、しかもトリプシン活性の認められるバンドをきりだし、家兎に免疫して抗ヒトproacrosin抗体を作製した。抗ブタproacrosin抗体を用いたWestern blot法でscreeningした結果、3例でproacrosinが検出されなかった。しかしそれらの3例を抗ヒトproacrosin抗体を用いてWestern blot法を施行した結果では、全例proacrosinを検出しえた。このことから、これらの3例では、抗ブタproacrosin抗体の認識する部位での分子異常が存在するものと推定された。現在それら症例のゲノムでのDNA異常がないかどうか直接塩基配列法で検討中である。