マウス胚発生過程における神経堤細胞の出現機構の解析

小鼠胚胎发育过程中神经嵴细胞出现的机制分析

• 批准号: 06771576
• 负责人: 井関 祥子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771576/
• 关键词: 神経堤細胞; transformation; マウス胚; in situ hybridization

神経堤細胞のtransformationおよび移動の両現象が起きている胎齢8〜9日のマウス胚約80体よりtotal RNAを抽出し、oligo(dT)セルロースカラムにてpoly(A)^+RNAを約5μg精製した。transforming growth factor-β(TGF-β)スーパーファミリー間でアミノ酸配列の相同性が高いC末端領域中の150base pair(bp)を増幅するような混合プライマーを作製し、上記mRNAに対してReverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)を行ったところ、約150bpの断片が増幅されてきた。よってこの断片を電気泳動により分離して回収し、ベクターに組み込んだ後に増幅されてきた断片のシークエンスを行った。シークエンスの結果、Bone Morphogenetic Protein(BMP)-2,BMP-4およびBMP-7が検出された。これらはいずれも既知の遺伝子であり、TGF-βスーパーファミリーに属する新規の遺伝子は検出されなかった。胎齢8〜9日胚に発現が確認されたBMP-4をすでに報告されている塩基配列よりプライマーを作製してPCRにてより長いcDNA断片を増幅させ、ベクターに組み込んだのちにリボプローブ作製し、whole mount in situ hybridizationを行った。BMP-4は、胎齢8.5日では、最後部体節より後方の中胚葉領域に観察された。また、胎齢9日では、成長してきた前肢芽の前部および後部に発現していた。これより、BMP-4そのものが神経堤細胞出現に直接関与することはないと考えられたので、BMP-2,およびBMP-7のmRNAの分布を検討する必要があると考えられた。また、新たなPCR用の混合プライマーを設計する必要が考えられた。

The phenomenon of transformation and migration of neurons began to occur in the 8 ~ 9 th day of pregnancy, and the total RNA was extracted, oligo(dT) was extracted and poly(A)^+RNA was purified by about 5μg. The identity of amino acid alignment between transforming growth factor-β(TGF-β) mRNA and protein has increased to a high of 150base pair(bp) in the C-terminal region. The hybrid plasmid was produced and the Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction(RT-PCR) was performed on the above mRNA. The fragment of approximately 150bp has been increased. The first step is to separate the two components and to increase the amplitude of the components. Bone Morphogenetic Protein(BMP)-2, BMP-4 and BMP-7 were detected. This is the first time that we've seen this. The expression of BMP-4 was confirmed in embryos 8 ~ 9 days after implantation, and was reported to be in the middle of the gene sequence. PCR was used to amplify the long cDNA fragment, and the whole mount in situ hybridization was carried out. BMP-4 was observed in the mesoderm area behind the last segment of the embryo at 8.5 days. On the 9th day of pregnancy, the anterior and posterior parts of the forelimb bud appear. It is necessary to investigate the distribution of mRNA of BMP-2, BMP-7 and BMP-4 directly related to the expression of these genes in neurons. The new PCR is designed to be a hybrid.

项目成果

Iseki S.: "Transforming growth factor β type I receptor localization in mouse development" 8th Int.Cong.Int.Soc.Differentiation. (in press). (1995)

Iseki S.：“小鼠发育中转化生长因子 β 型受体定位”第 8 届 Int.Cong.Int.Soc.Differentiation（印刷中）。