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ISH法を用いた歯周病関連菌の局在観察と薬剤感受性試験

ISH法对牙周病相关细菌的定位观察及药敏试验

基本信息

批准号：
06771784
负责人：
浅井昭博
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Aichi Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771784/
关键词：
歯周病 ISH法薬剤感受性歯周組織歯周ポケット細菌 DNA 歯肉

项目摘要

歯周病患者を対象に、歯周ポケット内からペーパーポイントを用いて細菌を採取し、培養法による細菌の同定を行い、歯周ポケット内細菌叢を個々の症例について明らかにした。それに続くP.gingivalisのDNA採取は、Smithらの方法によって行い、純培養を5%緬羊脱繊維素血液寒天平板培地にて得、白金耳で菌株を集菌した後、TEbuffer中に入れる。次に、-20℃のフリーザ-に入れることにより、DNA採取用サンプルを多数の症例についてストックした。加えてISH法による薬剤感受性の検討を行うために、歯周外科処置時等に除去したポケット内縁上皮および歯牙を標本とし、P.gingivalisのDNAプローベにてハイブリッドすることにより、P.gingivalisをin situにて同定する検体を多数ストックした。また各種薬剤の感受性をin vivoで調べるため、ペーパーポイントにてサンプリングした検体自体でDNAブローベによるハイブリッドができるよう、各種プローベの特異度・鋭敏度を調べるため、現在P.gingivalisの外膜蛋白および線毛遺伝子(fim A)についてその有用性を調査中。多数の臨床分離株について、DNAシーケンスされたP.gingivalisの標準株とDNAプローベに対するハイブリッドに差異がないことまで確認した。薬剤としてはテトラサイクリン系抗生物質のテトラサイクリン、ミノサイクリン、歯科Local Drug Delivery System応用薬剤のペリオクリン、SDPについて感受性試験を行った。以上の研究で歯周組織内への侵入が明らかとなっているP.gingivalisの局在を調べ得たことにより、薬剤の効果判定のみならず、歯周外科療法前後の、歯周病関連菌の局在の変化をP.gingivalisを用いたDNAプローベにより観察することが可能なので、特にGTR法におけるメンブレン上の細菌付着が、予後に与える影響を観察中。

In patients with dental diseases, there is a change in the number of bacteria in the tooth, and the number of bacteria in the tooth culture is equal to the number of bacteria in the tooth. The DNA of P. gingivalis was isolated by Smith's method, purified by 5% Myanmar sheep de-vitamin blood plate culture, and purified by TEbuffer. Next,-20 ℃ and the temperature of the sample. In addition, the ISH method is used to remove the DNA of the inner epithelium and the teeth, and the DNA of the P. genivalis is used to remove the DNA of the inner epithelium and the teeth. The sensitivity of various agents in vivo is modulated, and the specificity and sensitivity of various agents are modulated. The usefulness of P. genivalis outer membrane protein (fim A) is currently being investigated. Most of the clinical isolates were isolated from P. genivalis, and the differences between the standard strains and the DNA were confirmed. The drug sensitivity test is carried out for drug sensitivity test, drug sensitivity test and drug sensitivity test. The above studies show that the invasion of P. gingivalis in the peridental tissue is regulated by the regulation of the disease, the determination of the effect of the drug, the change of the disease related bacteria before and after the peridental surgical treatment, the detection of the DNA expression in the peridental tissue, and the possible detection of the bacterial expression in the peridental tissue by the GTR method.