熱ショック蛋白質を指標とした若年性歯周炎の診断法の開発

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臨床的に重篤な歯周疾患である若年性歯周炎は、その原因が解明されておらず、また、治療法も確立していないのが現状である。我々は、若年性歯周炎の患者の歯周ポケット中に多数のActinobacillus actinomycetemcomitansが存在することに着目し、この菌の熱ショック蛋白質に関する研究を行った。まず、大腸菌のgroEL遺伝子をプライマーとして、PCRを行い、Actinobacillus actinomycetemcomitansの熱ショック蛋白質遺伝子(groEL遺伝子)をクローニングした。クローニングしたgroEL遺伝子を挿入したプラスミドよりデレーション ミュータントを作成し、全塩基配列を決定した。同様の手法を用いてgroEL遺伝子の上流部に存在するgroES遺伝子の塩基配列を決定した。決定したgroESL遺伝子の塩基配列を大腸菌のgroESL遺伝子と比較した結果、大腸菌のgroESL遺伝子と著しく異なった塩基配列を示す部位が4ヶ所存在した。遺伝子を4部分に分け、それぞれにA.aに特異的な塩基配列を含むように制限酵素siteを設計し、発現ベクターに挿入した。