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ラッフル膜形成をモデルとしたアクチンとアクチン調節蛋白質の分子機構の解析

以皱褶膜形成为模型分析肌动蛋白和肌动蛋白调节蛋白的分子机制

基本信息

批准号：
06780578
负责人：
阿部洋志
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラッフル膜形成の分子機構を明らかにするべく、主に培養線維芽細胞(Swiss3T3細胞)及びヒトあるいはブタの好中球を用いて実験を行った。コンフルエントにした後血清濃度を下げて静止期に同調させた線維芽細胞に、蛍光標識したコフィリンとアクチンを同時にマイクロインジョエクションにより導入したところ、両者は既存の細胞骨格に組み込まれることなく細胞質中に分散して存在した。しかし、インジェクションした細胞のまわりに存在する細胞をはぎ取ることによって再活性化すると、細胞は速やかにラッフル膜を形成し移動し始めるようになる。このとき導入された蛍光標識コフィリン及びアクチンはどちらもラッフル膜に移行し、非常によく一致した局在を示すことが見出された。また、培養液中にNa-H-ポンプの阻害剤であるアミロライドを加えておくとラッフル膜の形成が阻害され、同時にアクチンとコフィリンの局在化も見られなくなった。この結果からラッフル膜の形成には細胞内pHの上昇が必要であることが示唆された。一方、好中球をfMLPやTPAで活性化すると、非常に速やかに細胞の変形が起こり、ラッフル膜を形成する。この時、コフィリンの著しい脱リン酸化が起こりラッフル膜へ局在するようになる。リン酸化されたコフィリンはアクチンへの結合能を失うことに既に見出しており、ラッフル膜の形成には活性のあるコフィリンが必要であることが示唆される。そこでフォスファターゼの阻害剤であるオカダ酸やカリキュリンAを加えたところ、これらの添加のみでコフィリオンの脱リン酸化が誘導された。しかしそのレベルはTPA処理によるそれとは異なり、完全な脱リン酸化には至らず、TPAなどにより活性化するとさらに脱リン酸化が起こった。このTPAによる脱リン酸化は10μMのオカダ酸を加えた時にのみ抑制されたことから、コフィリンの脱リン酸化を行っているのはタイプBのフォスファターゼであり、タイプ1や2Aはコフィリンをリン酸化するキナーゼの活性繊維に働いていると考えられる。

The molecular mechanism for membrane formation is described in detail below. The main culture line is derived from embryonic cells (Swiss 3T3 cells) and the main culture line is derived from embryonic cells. The serum concentration in the static phase was decreased, and the light identification was decreased. The cells in the static phase were dispersed in the cytoplasm. The cells are activated and the membrane is formed. This is the first time I've seen a photo of you. In addition, the formation of Na-H-P film in culture medium was inhibited, and the formation of Na-H-P film was inhibited. As a result, membrane formation is necessary for intracellular pH rise. A square, a good ball, a TPA activation, a very fast cell formation, a membrane formation. When the time comes, it's time to start acidification. The binding energy of the acid film is lost, and the activity of the acid film is necessary. The first step is to increase the concentration of the acid in the medium and to increase the concentration of the acid in the medium. TPA treatment can be different, completely deacidified, or activated. When the TPA is deacidified, the acid concentration of 10 μ M is increased, and the activity of TPA is decreased.