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ハイブリッド型人工肝臓への応用を目的とする肝細胞の高密度培養法の開発

肝细胞高密度培养方法开发用于混合型人工肝

基本信息

批准号：
06780718
负责人：
柳健一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780718/
关键词：
ハイブリッド型人工肝臓肝細胞高密度培養 polyviny formal 樹脂

项目摘要

【緒論】現在肝移植が唯一の救命手段となっている重症の肝不全に対する治療の切り札として、装置内に生体の肝組織を組み込んだ、ハイブリッド型人工肝臓の開発が活発になされている。ハイブリッド型人工肝臓の開発のためには、肝細胞の高密度大量培養法の開発がその鍵となるが、研究代表者は多孔質の樹脂である。polyvinylformal(PVF)樹脂多孔質体を用いる肝細胞の高密度培養法について報告してきた。本研究では、培養肝細胞の機能をより良好に維持することを目的として、PVF樹脂の表面修飾が肝細胞の機能の維持に与える影響を検討した。【実験方法】平均孔径が250μmのPVF樹脂を20×20×2mmに細切し、dish内に静置して培養に用いた。PVF樹脂をcollagenもしくはpoly-HEMA(hydroxyethylmcthacrylate)にてコートし、無処理の群と比較した。Wistar系雄性ラットから得た遊離肝細胞を4×10^6cells/PVFの濃度で播種して10日間の培養を行った。培地として10%fetal bovine serumを加えたWilliams′E培地を用いた。肝細胞の機能の指標として、アルブミン分泌能およびアンモニア代謝能の経時変化を測定した。また、PVF樹脂内に固定化された肝細胞密度の経時変化を測定した。【結果と考察】アルブミン分泌能は、collagcnコート群では無処置群と比し、48hr以降ほぼ一定の良好な結果を示した。一方、poly-HEMA群では、経時的にアルブミン分泌能は低下した。一方、アンモニア代謝能は、3群ともほぼ同じ傾向で、培養時間の経過とともに低下した。一方、PVF樹脂内に固定化された肝細胞密度は、3群とも経時的に減少傾向を示したが、poly-HEMA群では当初から固定化細胞数が少なく、固定化効率に問題があるものと考えられた。Collagenコート群では無処置群よりやや良好な結果を示した。PVF樹脂を用いる肝細胞培養において、PVF樹脂をcollagenでコートすることにより、肝細胞の代謝能が無処置のものと比較して良好に保たれる可能性が示唆された。今後、潅流培養法により、さらに高密度に肝細胞を培養し得る条件について検討が必要と思われる。

【緒論】現在肝移植が唯一の救命手段となっている重症の肝不全に対する治療の切り札として、装置内に生体の肝組織を組み込んだ、ハイブリッド型人工肝臓の開発が活発になされている。ハイブリッド型人工肝臓の開発のためには、肝細胞の高密度大量培養法の開発がその鍵となるが、研究代表者は多孔質の樹脂である。聚乙烯醇缩甲醛（PVF）是一种用聚乙烯醇缩甲醛细胞高密度聚合法制备的新型聚合物。本研究探讨肝纤维化、肝癌细胞增殖能力低下要求良好的维持肝纤维化目的的诊断标准，PVF肝硬化表面修复肝癌细胞增殖能力低下维持肝纤维化与造影的关系。[保留方法]平均粒径为250μm的PVF树脂平均粒径为20×20×2mm，采用平皿内静置法制备。PVF胶原蛋白胶原蛋白聚甲基丙烯酸羟乙酯（HEMA）骨架胶，胶原蛋白胶原蛋白聚甲基丙烯酸羟乙酯（HEMA）骨架胶。Wistar系非特异性增殖实验获得的肝细胞4×10^6cells/PVF增殖度增殖试验形成10天的增殖周期进行传代。用10%胎牛血清作稀释剂，加入威廉姆斯′E缓冲液。肝細胞の機能の指標として、アルブミン分泌能およびアンモニア代謝能の経時変化を測定した。PVF脂质内固定化肝细胞凋亡程度低，脂质过氧化程度低。[水果酵素检验]胶原蛋白酵素分散能力强，胶原蛋白酵素群酵素组群酵素比酵素，48hr以降血糖一定程度良好的水果酵素表示。一方，poly-HEMA群烯，邵氏的聚甲基丙烯酸酯分散剂能分散下烯。一方、アンモニア代謝能は、3群ともほぼ同じ傾向で、培養時間の経過とともに低下した。一方为PVF内固定化肝癌细胞密度计、3群胶原蛋白脂质体的寡核苷酸向显性表达量计、poly-HEMA群胶原蛋白原位杂交固定化肝癌细胞数寡核苷酸、固定化率低的肝癌细胞特异性抗体。胶原蛋白胶原蛋白群胶原蛋白装置群胶原蛋白申请表PVF肝细胞胶原替代品申请，PVF肝细胞胶原替代品申请，肝细胞胶原替代品能替代装置替代品申请，比替代品申请更好地保证替代品的可能性。今後、潅流培養法により、さらに高密度に肝細胞を培養し得る条件について検討が必要と思われる。