ミトコンドリアATP依存性プロテアーゼの特異的基質SP-22の調節と生理機能

线粒体 ATP 依赖性蛋白酶特异性底物 SP-22 的调节和生理学

• 批准号: 06740635
• 负责人: 廣井 朋子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740635/
• 关键词: ATP依存性プロテアーゼ; 酸化ストレス; Alkyl hydroperoxide reductase; Thioredoxin reductase; 活性酸素; ミトコンドリア; 副腎皮質

本年度は次の2点について研究成果が得られた。1)SP-22の生化学的機能の検索SP-22のアミノ酸配列のホモロジー検索により、いくつかの類似タンパクがわかっているが、これらのうち生化学的機能がわかっているものとして、SalmonellaのAlkyl hydroperoxide reductaseおよび酵母のThioredoxin reductase(Thiol specific antioxidant)がある。このふたつのタンパクはいずれも、活性酸素を消去する活性をもっている。そこで、SP-22にも同様の活性があるかどうか検討した。方法は、活性酸素に対して極めて感受性が高いトリプトファン水酸化酵素の失活を抑える活性として測定した。その結果、精製SP-22はほとんど活性をもたなかったが、血清を加えると強い活性が出現した。この活性がトリプトファン水酸化酵素に対する直接作用ではないことは、SP-22は血清存在下に、活性酸素によるヘモグロビンの酸化阻止活性、グルタミン合成酵素の失活阻止活性をもっていることから明らかである。血清中の有効成分は、高分子量であり、熱不安定性であるので、タンパク質であると思われる。活性酸素の発生系としては、ジチオスレイトール-Fe^<2+>を用いたが、ジチオスレイトールのかわりにアスコルビン酸を用いると血清存在下でも活性は検出されなかった。SP-22は酸化還元酵素と考えられるので、このことはジチオスレイトールが活性酸素発生系としてだけでなく、SP-22の還元系としても機能していることを示唆している。2)SP-22遺伝子の解析われわれはすでにSP-22のcDNAをクローニングしているが、これをプローブとして、ヒトgenomic libraryをスクリーニングし、SP-22遺伝子のクローンを3つ単離した。これらについて現在解析中であるが、PCRによる解析から、SP-22遺伝子は、複数のエクソンから成っていることがわかった。

This year, the research results of the second time have been obtained. 1) Biochemical function of SP-22: Alkyl hydroperoxide reductase of Salmonella and Thioredoxin reductase(Thiol specific antioxidant) of yeast. The activity of the active acid is eliminated. The SP-22 has the same activity as the SP-22. Methods: To determine the activity of active acid in the enzyme. Results, refined SP-22, serum, increased activity The activity of this enzyme is directly related to the activity of water acidifying enzyme in the presence of serum SP-22. The activity of active acid is related to the activity of acid inhibiting enzyme in the presence of serum SP-22. The activity of inactivating enzyme in the presence of serum SP-22 is related to the activity of acid inhibiting enzyme in the presence of serum SP-22. There are components in serum, high molecular weight, thermal instability, and quality. Active acid production system: In the presence of serum, active acid production system: Fe^<2+> SP-22 Acidifying Reductant Enzyme and Its Function in Active Acid Production System 2) Analysis of SP-22 cDNA: The analysis of SP-22 cDNA: This is the case with SP-22, PCR, SP-22, SP-22 and SP-22.

项目成果

S.Watabe,H.Kohno,H.Kouyama,T.Hiroi,N.Yago and T.Nakazawa: "Purification and characterization of a substrate protein for mitochondrial ATP-dependent protease in bovine adrenal cortex" Journal of Biochemistry. 115. 648-654 (1994)

S.Watabe、H.Kohno、H.Kouyama、T.Hiroi、N.Yago 和 T.Nakazawa：“牛肾上腺皮质线粒体 ATP 依赖性蛋白酶底物蛋白的纯化和表征”生物化学杂志。