ミトコンドリアATP依存性プロテアーゼの特異的基質SP25の細胞における分化役割-ヒト赤白血病細胞およびマウス副腎皮質培養細胞株Y-1におけるcDNAクローニングおよび発現調節

线粒体ATP依赖性蛋白酶特异性底物SP25在细胞中的差异作用-人红白血病细胞和小鼠肾上腺皮质培养细胞系Y-1的cDNA克隆和表达调控

• 批准号: 05740512
• 负责人: 廣井 朋子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05740512/
• 关键词: ATP依存性プロテアーゼ; ミトコンドリア; 副腎皮質; システイン; cDNA

研究実施計画にしたがって研究を進め、次の結果を得た。(1)PCRで増幅させたSP-22^*cDNA断片(350bp)をプローブとしてウシ副腎髄質cDNAライブラリー(市販)をスクリーニングし、4つのクローンを得た。これらのクローンの塩基配列の解析により、成熟タンパクの全コード領域を含む1,463塩基を決定した。(DDBJ/EMBL/GenBankのaccessionNO,D28549)(2)成熟タンパクのコード領域の推定アミノ酸配列は、プロテインシーケンサーで決定したアミノ酸配列と47番アミノ酸を除いて完全に一致した。またその5'上流にはミトコンドリア移行シグナルと考えられる61アミノ酸の配列があり、この配列はマウス赤白血病細胞のMER-5のN末端配列と64%のホモロジーを示した。(3)未同定の47番アミノ酸はcDNAからはシステインであったのでシステインが修飾を受けたものであろうと考え、このアミノ酸を含むペプチド断片のFAB-Mass解析を行ったところ47番アミノ酸はシステインのSHが亜硫酸に酸化されたCysteine-sulfinic acidであることがわかった。Cysteine-sulfinic acidあるいはさらに酸化されたシステイン酸はnativeなタンパク中に見い出された例はないので、おそらくnativeな状態ではCysteine-sulfenic acid(Cys-SOH)であろうと思われる。Cys-SOHはいくつかの酵素で酸化還元中心として機能していることがわかっているので、SP-22はおそらく酸化還元酵素またはelectron carrierであろうと推定される。^*これまではSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動上のみかけの分子量からSP-25と呼んでいたが、全アミノ酸配列の決定により真の分子量が確定したのでSP-22と改めた。

The research plan was implemented and the results were obtained. (1)PCR amplification of SP-22^*cDNA fragment (350bp) was detected. The analysis of the base arrangement of the sample and the determination of the base of the sample in the whole sample area include 1,463 bases (DDBJ/EMBL/GenBank accessionNO,D28549)(2) The putative acid alignment of mature species is completely consistent with that of mature species. The N-terminal alignment of MER-5 in red leukemia cells was 64%. (3)The FAB-Mass analysis of 47 different kinds of acids containing different kinds of FAB-Mass fragments was carried out by using Cysteine-sulfinic acid as the acidification agent of 47 different kinds of acids. Cysteine-sulfinic acid(Cys-SOH) is a natural acid. Cysteine-sulfinic acid(Cys-SOH) is a natural acid. Cys-SOH is the enzyme that acidifies the redox center, and SP-22 is the enzyme that acidifies the redox electron carrier.^* The molecular weight of SDS-25 and SP-22 was determined by the determination of the acid alignment.

项目成果

Watabe,S.,T.Hara,H.Kohno,T.Hiroi,N.Yago,and T.Nakazawa: "In vitro degradation of mitochondrial proteins by ATP-dependent protease in bovine adrenal cortex." Journal of Biochemistry. 113. 672-676 (1993)

Watabe，S.，T.Hara，H.Kohno，T.Hiroi，N.Yago 和 T.Nakazawa：“牛肾上腺皮质中 ATP 依赖性蛋白酶对线粒体蛋白的体外降解。”

Watabe,S.,K.Kohno,H.Kouyama T.Hiroi,N.Yago,and T.Nakazawa: "Purification and characterization of a substrate protein for mitochondrial ATP-dependent protease in bovine adrenal cortex." Journal of Biochemistry. 115(印刷中). (1994)

Watabe, S.、K. Kohno、H. Kouyama T. Hiroi、N. Yago 和 T. Nakazawa：“牛肾上腺皮质中线粒体 ATP 依赖性蛋白酶的底物蛋白的纯化和表征”《生物化学杂志》115。 （正在出版）（1994）。