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ウイルスRNAによる都市生態系の衛生環境保全の監視手法に関する研究

利用病毒RNA保护城市生态系统卫生环境的监测方法研究

基本信息

批准号：
06750581
负责人：
神子直之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06750581/
关键词：
RNAファージ水道水都市下水 DNAプローブ遺伝子検出

项目摘要

1.DNAプローブ法の環境水への適用手法の開発標識した遺伝子断片を用いた特異的遺伝子の検出法であるDNAプローブ法を、環境水に含まれるウイルス検出に適用する方法について検討した。モデルウイルスとして、RNAファージQβを用い、それを標的とする遺伝子の特異的検出を目指した。Qβ遺伝子のPCR産物(190bp)を鋳型とし、標識したDNA断片を作成し、プローブとした。しかし、標識のシグナルがX線フィルム上で検出されるにはプローブが1000以上必要であり、1粒子に1コピーしか標的遺伝子を有しないウイルスについて高感度の検出をおこなうためには、シグナルの強度をより強いものに改良する必要があることがわかった。2.環境水からの特定遺伝子の検出1.で述べた理由により高感度検出は難しいので、作成したプローブを、メンブレン上にブロッティングした高濃度のMS2、T4、Qβの遺伝子にハイブリダイズさせ、X線フィルムに感光した。T4は検出されなかったが、MS2はQβ断片とホモロジーがあり、検出された。また、寒天培地上に形成されたQβプラックをメンブレン上に写し取り、プローブをハイブリダイズさせて検出可能であった。野生のウイルスの検出後の同定に用いることについては、可能であると考えられる。3.ウイルス遺伝子の都市生態系における挙動の解明プローブのシグナルが強くなる可能性があることから、水道水、生下水、下水処理水、加えて、減菌した液体培地のそれぞれについて、遺伝子を検出する際の、プローブ法の誤陽性について検討を行った。それぞれの試水を膜で濃縮した場合、通水量に応じてシグナルが大きくなることから、誤陽性を生じさせる物質が存在していることがわかった。都市生態系における遺伝子の挙動を調べるためには、遺伝子の絶対濃度を減少させずに試料を精製する手法の開発が不可欠である。

1. DNA detection method and environmental water detection method for identification of DNA fragments The expression of RNA in a cell is called "RNA." PCR product of Qβ gene (190bp) was typed and identified as DNA fragment. For example, if the number of particles in the X-ray is greater than 1000, the number of particles in the X-ray is greater than 1000. If the number of particles in the X-ray is greater than 1000, the number of particles in the X-ray is greater than 1000. If the number of particles in the X-ray is greater than 1000, the number of particles in the X-ray is greater than 1000. 2. The detection of specific molecules in environmental water 1. The reasons for this are as follows: high sensitivity, high sensitivity, high concentration of MS2, T4, Q beta molecules, high sensitivity, X-ray sensitivity. T4 In addition, the Qβ pyloric box formed on the ground in cold weather is written on the menu, and the pyloric box is written on the menu. Wild and wild, wild and wild, wild and wild. 3. It is possible to investigate the possible causes of pollution in urban ecosystems, such as sewage, raw water, sewage treatment water, addition of water, reduction of bacteria, liquid culture, detection of pollutants, and false positive detection of pollutants. When the test water is concentrated, the amount of water passes through the membrane, and the substance is present. The development of methods to reduce the concentration of pollutants in urban ecosystems and to refine samples is indispensable.