遺伝子組換え菌からのパルス電界を利用した有用遺伝子産物の生産

利用转基因细菌的脉冲电场生产有用的基因产物

• 批准号: 06750819
• 负责人: 大嶋 孝之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06750819/
• 关键词: 遺伝子組換え; パルス電界; タンパク質

本研究では微生物にパルス電界を印加したときの、遺伝子産物などの有用タンパク質の放出特性に関して研究を行った。使用菌株としてタンパク質放出特性を調べる上で形態がよく調べられているモデル微生物として酵母を用い、その放出特性に関して検討を行った。また遺伝子組換え菌としてBacillus stearothemophilus由来の耐熱性アミラーゼを産出する組換え大腸菌Escherichia coli/pHI301を使用した。高電圧パルス発生電源としてはコンデンサーに充電された電気エネルギーをスパークギャップを通して処理槽に印加し、5kVから15kV程度のパルス電圧を印加することが可能である装置を用いた。まず酵母を蒸留水に懸濁してパルス電界を印加したところ,わずか数十秒の処理時間で酵母内のタンパク質が放出されることがわかった。また印加するパルス電界強度によるインベルターゼとアルコール脱水素酵素の放出特性を調べたところ、比較的低いパルス電界(8〜10kV)でインベルターゼが放出され始め、アルコール脱水素酵素は14kV以上のパルス電界を印加しないと放出されないことが判明し、電界強度のコントロールによる細胞内タンパク質の選択的放出の可能性が示唆された(J.Electrostatics,in press)。Escherichia coli/pHI301を蒸留水に懸濁して10kVのパルス電界を印加した場合、超音波処理で完全に菌体を粉砕さた場合(1500U/ml)に比べて、わずか50U/mlしかアミラーゼ放出が認められなかった。そこでNaClの添加効果を調べたところ、5%NaCl中で最大約1250U/mlと超音波処理の場合の80%を放出させることができた。また1%NaClの時には放出量約1100U/mlで比活性は約15U/mg-proteinとなり、超音波処理の約8倍で放出させることが可能であった。現在、本研究で得られた成果をまとめて論文投稿するために準備している。

This study is based on the research on the emission characteristics of microorganisms and the electrolytic community of Inca and the useful substances of the legacy products. The strain used is としてタンパク, which releases the characteristic of をadjusted べる上でform, がよくadjusted べられていThe るモデルmicroorganism and としてyeast are used and the そのrelease characteristics are に关して検椒行った. Bacillus stearothemophilus origin of heat resistance アミラーゼを production of する group replacement of Escherichia coli/pHI301 した. High-voltage electric power supply for charging The processing tank is equipped with a 5kV and 15kV electric voltage, which can be used as a device.まずYeast をSteamed water にSuspended してパルス电界をInca したところ, わずか number The processing time of ten seconds allows the yeast to be released into the yeast.またInca するパルスElectric boundary strength によるインベルターゼとアルコールDehydratase enzyme のrelease characteristics を Adjustment べたところ、Comparative low-voltage electric circuit (8~10kV) でインベルターゼがreleases されstartめ、アルコールdehydrase enzymeは14kV and above のパルスElectric world をInca しないとrelease されないことがdeterminationし、Electric world strength のコントロールにThe possibility of release of intracellular electrostatic substances is shown in J. Electrostatics, in press). Escherichia coli/pHI301, the condition of the 10kV electric boundary and the Inka water, and the ultrasonic treatment of the complete cellsをささた occasion (1500U/ml) に比べて, わずか50U/ml しかアミラーゼrelease められなかった. The added effect of NaCl is to adjust the effect, and in 5% NaCl, the maximum is about 1250U/ml, and in the case of ultrasonic treatment, 80% is released. The specific activity of 1% NaCl is about 1100U/ml, and the specific activity is about 15U/mg-protein. The release rate is about 8 times that of ultrasonic treatment. At present, the results of this research have been obtained and the paper is being submitted and is being prepared.