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電気化学法を用いた高感度な配列特異的遺伝子検出法の開発

利用电化学方法开发高灵敏度序列特异性基因检测方法

基本信息

批准号：
06750836
负责人：
井原敏博
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子工学における非RI化は実験者の安全性、環境問題はもとより、操作の簡便化、高速化にも繋がり、分子生物学の発展に寄与するところは計り知れないものがある。申請者は、酸化還元活性な金属錯体とオリゴヌクレオチド、あるいはインターカレータのコンジュゲートを合成した。合成した酸化還元活性オリゴヌクレオチドはターゲットDNA(1本鎖、2本鎖)と安定な錯体を形成する。この錯形成反応の熱力学的パラメータを複合体の融解曲線の解析と滴定型の熱測定装置を用いた2つの手法によって求めることができた。これによると、フェロセン修飾によって3本鎖複合体は2〜3kcal mol^<-1>の安定化を受けていることがわかった。恐らく、2本鎖のターゲットDNAのメジャーグルーブ内の塩基と、フェロセンをつなぐアミド結合部位の水素結合、あるいはリンカー部位の疎水的な相互作用が寄与したものであろう。修飾によって、錯生成反応のエンタルピーだけでなくエントロピーも比較的大きく変化したことにより、より協同性の高い結合となった。温度コントロールによるプローブのオンオフ制御を考えたときには非常に都合がよい。サイクリックボルタンメトリーにより電気化学挙動の基礎的な検討を行なった。その結果、フェロセン修飾オリゴヌクレオチドの酸化還元電位は、ターゲットの二次構造(1本鎖、2本鎖)やターゲットの前後のシークエンスにほとんど影響を受けないことがわかった。したがって、本プローブはこれらの事柄を全く考慮することなく検出系にそのまま応用できる。

The safety of non-RI-based researchers in genetic engineering, environmental issues, ease of operation, high speed, development of molecular biology, and the development of molecular biology The applicant shall be responsible for the synthesis of active metal complexes. The synthesis of DNA is very important for the synthesis of DNA(1-lock, 2-lock). Thermodynamic analysis of complex melting curve and titration type calorimetry 3. The lock complex is stabilized by 2 ~ 3kcal mol^<-1>. 2. The binding site of the DNA molecule in the DNA molecule and the interaction between the DNA molecule and the water molecule in the DNA molecule. The main purpose of this paper is to improve the quality of the products and improve the efficiency of the products. The temperature of the water is very high, and the temperature of the water is very high. The basic principles of electrochemistry are discussed in detail. As a result, the acidification reduction potential of the modified Oritaka Oritaka is affected by the influence of the secondary structure (1-lock, 2-lock) of the Taigaiga All of these things are taken into account.