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DNA修飾ナノスフェアの選択的凝集を利用する遺伝子の識別

利用 DNA 修饰纳米球选择性聚集的基因鉴定

基本信息

批准号：
11750704
负责人：
井原敏博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

DNA修飾超微粒子の調製表面にカルボキシル基を導入した直径約40nm、及び1μmのポリスチレン製のナノ微粒子(蛍光色素が含浸させてある)と末端にアミノ基を有するオリゴヌクレオチド(ODN)を水溶性のカルボジイミドを用いてアミド結合を形成させることによりカップリングさせ、DNA修飾ナノスフェアを調製した。固液界面におけるハイブリダイゼーションに関する基礎研究直径1μmの微粒子を用いて、修飾するODNの種類、温度、塩濃度などの諸条件が微粒子表面でのハイブリダイゼーション効率に与える影響について検討した。その結果、有効なハイブリダイゼーションには塩基対形成に供されることのないリンカーの存在が不可欠であることが分かった。また、適当な温度、塩濃度条件下、1/15の変異(15塩基のうちの1塩基の変異)を導入したODNは微粒子に固定化したODNとほとんどハイブリダイズしないことが分かった。これは、微粒子上における固液間のハイブリダイゼーションが通常の液相におけるそれ同様の特異性を維持していることを意味する。微粒子の顕微鏡観察蛍光顕微鏡を用いてp53遺伝子試料(p53遺伝子の一部、ホットスポットを含む45量体)の検出実験を行った。緑と赤の蛍光を発する直径40nmの微粒子にそれぞれp53遺伝子の別の部位に相補的なODNを修飾した。分散溶液の塩濃度を上げると、これらの微粒子は凝集した。凝集体を蛍光顕微鏡で観察したところ、p53非存在下ではランダムに分散した赤と緑の塊が見られたが、p53共存下では黄色の凝集体のみが見られた。即ち、両微粒子はp53によって架橋されることで均一に集まり、その分布が完全に一致したために、赤と緑の合成色である黄色のみが観測できたと考えられる。遺伝子の簡便な多色アッセイの可能性を示すことができた。

Modulation of DNA-modified ultrafine particles The diameter of the surface にカルボキシルを introduced is about 40nm, and the のポリスチレンPreparation of micro-particles of のナノ(荍光色が impregnated with させてある) and terminal にアミノbased を有するオリゴヌクレオチド(ODN)をWater-soluble のカルボジイミドをUse いてアミド combined を shape成させることによりカップリングさせ, DNA modified ナノスフェアをmodulation した. Basic research on solid-liquid interface interface Specifications for the type, temperature, and concentration of fine particles with a diameter of 1 μm and the use of modified ODN The efficiency of the microparticle surface is affected by the efficiency of the microparticles. The results of the effective resultsれることのないリンカーのexistent がcannot owe であることが分かった.また, under the conditions of appropriate temperature and chlorine concentration, 1/15 の変different (15 塩组のうちの1塩baseの変different) をguidance Into the fine particles of ODN and the immobilization of ODN.これは、Fine particle upper におけるsolid-liquid space between solid and liquid The liquid phase of the liquid phase is the same as the specificity of the liquid phase. Observation of microparticles using microscopic microscopy using a いてp53 缝子 sample (p53 缝子の一, ホットスポットをcontaining む45 volume). Green and red の蛍光を発する 40nm in diameter のmicroparticle にそれぞれp53 缝子のdifferent parts and complementary なODN をmodification した. The concentration of the dispersion solution is high and the fine particles are agglomerated. Condensed body light microscopic examination, dispersion in the absence of p53 The coexistence of the red and green block が见られたが and the p53 coexistence of the yellow condensed body のみが见られた. That is, ち, 両 microparticles はp53 によって bridge されることでuniform にassemble まり, そのdistribution がcomplete All colors are uniform, red and green are synthetic colors, and yellow is the same color. The possibility of leaving a simple and multi-color アッセイのをshows すことができた.