DNA修飾ナノスフェアの選択的凝集を利用する遺伝子の識別

利用 DNA 修饰纳米球选择性聚集的基因鉴定

• 批准号: 11750704
• 负责人: 井原 敏博
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11750704/
• 关键词: DNA; オリゴヌクレオチド; ナノスフェア; ハイブリダイゼーション; ナノテクノロDジー; 遺伝子診断; p53遺伝子; 凝集体; DNA修飾ナノスフェア; 超微粒子; 遺伝子検出法; 蛍光顕微鏡

DNA修飾超微粒子の調製 表面にカルボキシル基を導入した直径約40nm、及び1μmのポリスチレン製のナノ微粒子(蛍光色素が含浸させてある)と末端にアミノ基を有するオリゴヌクレオチド(ODN)を水溶性のカルボジイミドを用いてアミド結合を形成させることによりカップリングさせ、DNA修飾ナノスフェアを調製した。固液界面におけるハイブリダイゼーションに関する基礎研究 直径1μmの微粒子を用いて、修飾するODNの種類、温度、塩濃度などの諸条件が微粒子表面でのハイブリダイゼーション効率に与える影響について検討した。その結果、有効なハイブリダイゼーションには塩基対形成に供されることのないリンカーの存在が不可欠であることが分かった。また、適当な温度、塩濃度条件下、1/15の変異(15塩基のうちの1塩基の変異)を導入したODNは微粒子に固定化したODNとほとんどハイブリダイズしないことが分かった。これは、微粒子上における固液間のハイブリダイゼーションが通常の液相におけるそれ同様の特異性を維持していることを意味する。微粒子の顕微鏡観察 蛍光顕微鏡を用いてp53遺伝子試料(p53遺伝子の一部、ホットスポットを含む45量体)の検出実験を行った。緑と赤の蛍光を発する直径40nmの微粒子にそれぞれp53遺伝子の別の部位に相補的なODNを修飾した。分散溶液の塩濃度を上げると、これらの微粒子は凝集した。凝集体を蛍光顕微鏡で観察したところ、p53非存在下ではランダムに分散した赤と緑の塊が見られたが、p53共存下では黄色の凝集体のみが見られた。即ち、両微粒子はp53によって架橋されることで均一に集まり、その分布が完全に一致したために、赤と緑の合成色である黄色のみが観測できたと考えられる。遺伝子の簡便な多色アッセイの可能性を示すことができた。

Dna-modified ultrafine particle size modulation Surface に カ ル ボ キ シ ル base を import し た about 40 nm in diameter, and 1 mu び m の ポ リ ス チ レ ン system の ナ ノ particles (蛍 photopigment が containing leaching さ せ て あ る) と end に ア ミ ノ を has an す る オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド (ODN) を water-soluble の カ ル ボ ジ イ ミ ド を with い て ア ミ ド combined を form さ せ る こ と に よ り カ ッ プ リ ン グ Youdaoplaceholder0, DNA modification ナノスフェアを modulates た. Solid-liquid interface に お け る ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に masato す る basic research one microns in diameter の を particles with い て, modified す る ODN の type, temperature, salt concentration な ど の conditions が particles surface で の ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に sharper rate with え る influence に つ い て beg し 検 た. そ の results, unseen な ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に は salt base forming に for seaborne さ れ る こ と の な い リ ン カ ー の is が not owe で あ る こ と が points か っ た. ま た, appropriate の な temperature, salt concentration conditions, 1/15 - vision (15 salt の う ち の 1 salt base の variations) を import し た ODN は particles に immobilized し た ODN と ほ と ん ど ハ イ ブ リ ダ イ ズ し な い こ と が points か っ た. こ れ は, micro particle に お け る between solid-liquid の ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン が の liquid usually に お け る そ れ with others の specificity を maintain し て い る こ と を mean す る. Light particles の 顕 micromirror 観 examine 蛍 顕 micromirror を with い て p53 heritage 伝 son test material (p53 heritage 伝 の a, ホ ッ ト ス ポ ッ ト を む 45 content) の 検 out be 験 を line っ た. Light green と red の 蛍 を 発 す る diameter 40 nm の particles に そ れ ぞ れ p53 heritage 伝 の son don't の parts に phase of な ODN を modified し た. The <s:1> salt concentration を of the dispersed solution is used to coagulate the げると and <s:1> れら <s:1> fine particles <s:1> on the を. Coagulation collective を 蛍 light 顕 micromirror で 観 examine し た と こ ろ, p53, the presence of で は ラ ン ダ ム に scattered し た と red and green の block が see ら れ た が, under the coexistence of p53 で は yellow の coagulation collective の み が see ら れ た. Namely ち, struck particles は p53 に よ っ て bridging さ れ る こ と で に set uniform ま り, そ の distribution が に completely consistent し た た め に color, red green と の synthetic で あ る yellow の み が 観 measuring で き た と exam え ら れ る. The 伝 sub-<s:1> simplicity な multicolor アッセ <s:1> possibility を shows す とがで とがで とがで た た.

项目成果

Toshihiro Ihara: "Aggreotion of DNA-Moditied Nanospheres Depending on Added Polynucletide"Chewistry Letters. 1041-1042 (1999)

Toshihiro Ihara：“DNA 修饰纳米球的聚集取决于添加的多核苷酸”Chewistry Letters。

Toshihiro Ihara: "Metal Ion-Directed Cooperative Triple Helix Formation of Glutamic Acid-Oligonucleotide Conjugate"J.Am.Chem.Soc.. 123. 1772-1773 (2001)

Toshihiro Ihara：“谷氨酸-寡核苷酸缀合物的金属离子定向协同三螺旋形成”J.Am.Chem.Soc.. 123. 1772-1773 (2001)

井原敏博: "DNAコンジュゲートを用いた核酸の新しい分離・分析法"化学と工業. 53. 105-110 (2000)

Toshihiro Ihara：“使用 DNA 缀合物的核酸分离和分析新方法”化学与工业 53. 105-110 (2000)。