ボツリヌスC1型神経毒素のアクセプターの一次構造と分子機構

肉毒杆菌C1神经毒素受体的一级结构及分子机制

• 批准号: 06760270
• 负责人: 森石 恆司
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760270/
• 关键词: ボツリヌス; 神経毒素; 神経細胞; アクセプター

パニングによるボツリヌス神経毒素の標的細胞上のアクセプター分子の単離するために、1.毒素分子上の結合領域の大腸菌による発現、2.パニングによるアクセプター分子の単離の二段階で行うことにした。1.毒素分子上の結合領域の大腸菌による発現C1型毒素とD型毒素は結合する標的細胞上のアクセプター分子は異なると考えられ、その毒素分子結合領域は毒素分子上のC末端側に存在すると考えられている。毒素分子上の結合領域の位置を正確に把握すると共にその部分をクリアカットに単離するために、C1型およびD型毒素遺伝子を単離し、大腸菌で発現する試みを行った。C1型毒素遺伝子をC型6813株からPCRによって、八つの断片として単離し、全核酸配列を決定した。コードされるC1型毒素は1280個のアミノ酸で構成され、分子量147,814であった。また、D型毒素遺伝子をD型サウスアフリカ株の毒素伝達ファージのゲノムDNAから、プラスミドベクターを用いてクローニングした。そこにコードされるD型毒素は既に発表されているC型ストックホルム株とD型1873株の毒素とから構成されるキメラ毒素であることがわかった。結合領域はC末端に存在し、しかもC1型毒素とD型毒素と構造が異なることが予想される。したがって、それら毒素分子の比較分析からC末端380個以内にアクセプター結合領域が存在すると推定した。そのC末端380個と、その中でもさらに相同性低いC末端100個の領域をPCRによって増幅し、PLプロモーターによって発現するpTrxFusベクターに組み込み可溶化画分にチオレドキシン融合蛋白質として得た。その発現蛋白質の結合活性を各種神経芽細胞で検査中である。2.パニングによるアクセプター分子の単離NG108細胞からmRNAを単離し、それらcDNAを合成しベクターに組み込みCOS細胞で発現ライブラリーを作成した。抗チオレドキシン抗体をプレートに結合させ、発現融合蛋白質をその抗体に結合させ、結合細胞をクローニングしているところである。

The supernatant of the supernatant of the mycotoxin was isolated from the cell and the molecule was isolated. The toxin molecule has been detected by the combination of bacteria in the field. Please tell me that the molecules are isolated from the second section of the computer. 1. The presence of C-terminal DNA on the C-terminal of the C-terminal of the toxin molecule and the C-terminal terminal of the toxin molecule. The location of the toxin molecule in the field is correct and correct. Make sure that some of the toxins are isolated from each other, the type C1 toxin is isolated from the D-type toxin, and the pathogens can be detected. 6813 strains of C type C1 toxin were isolated from PCR spores, eight fragments were isolated, and the whole nucleic acid alignment was determined. 1280 strains of C _ 1 toxin were isolated and purified, with a molecular weight of 147814. Type D toxin, type D toxin and type D toxin. 1873 strains of type D toxin were isolated from the table of type C toxin and type D toxin. Combined with the presence of C-terminal toxin in the field, C-type toxin C-1 toxin, type D toxin, type C toxin, type C-terminal toxin, C-terminal toxin and C-terminal toxin. Molecular comparative analysis of antigens and antitoxins within the C-terminal of 380 antigens in combination with the field, there is a presumption of antigens. Three hundred and eighty people at the end of the PCR, the same in the middle, the same in the middle, the same at the end of C, and one hundred in the field at the end of C, and the PL in the terminal showed that the pTrxFus was soluble. The fusion protein was successfully purified. The protein binding activity was detected in the cells of the germ cells. two。 The molecules are isolated from the NG108 cells, the mRNA cells are isolated, the cDNA cells are synthesized, the COS cells are isolated, the COS cells are isolated, the molecules are isolated, the molecules The fusion protein was detected by the combination of antibody and antibody, and the fusion protein was detected by antibody binding.