頚動脈小体の化学受容器の電気生理学的研究

颈动脉体化学感受器的电生理学研究

• 批准号: 06770023
• 负责人: 三浦 章
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770023/
• 关键词: ラット; 節状神経節; 細胞培養; ホールセルパッチクランプ法; 膜電流; 膜電位

成体ラットをネンブタール麻酔(40mg/kg,i.p.)後、頚動脈小体、節状神経節、上頚神経節を摘出し、細胞分離のためにtrypsin(Sigma TypeIII)50,000U/ml、Collagenase 4mg/mlを含んだハンクス液に入れ、約20分間37℃で培養後、遠心し、次にCollagenase 4mg/mlを含んだハンクス液に入れ、約20分間37℃で培養後、遠心し細胞培養液(ダルベッコ変法イ-グル培地)を入れた小型容器(3ml)に入れた。細胞の分離をよくするために顕微鏡下でパスツールピペットを用いてゆっくりと細胞分離した。その後、CO_2インキュベータ-にて24時間保存し、培養した。その後ホールセルパッチクランプ法を用いてこの細胞の膜電流、静止膜電位、活動電位の閾値を記録した。実験にあたって培養液とは異なる細胞内・外液を作製し、Na、K、Caそれぞれ単独の電流の記録を試みた。その結果Na電流の記録のためには、130mM NaCl、10mM MgCl_2、7.5mM TEA、5mM HEPES、10 mM glucoseを細胞外液に、ピペット内液には、130mM CsCl、20mM TEA、11mM EGTA、1mM CaCl_2、10mM HEPESを用い、Caチャネル、Kチャネルの活動を阻害した。K電流の記録には1μM TTX、15mM Co^<2+>を含む、modified Tyrode液、ピペット内液には、K-HEPESを含むKCl液を用いた。またCa電流記録には1μMTTX 2.5mM Ca^<2+>を含むTEA溶液を細胞外液に5mM、EGTA、10mM Cs-HEPESを含むCsCl液をピペット内液に用いることにした。節状神経節細胞の静止膜電位は平均-55.4±9.7mV(n=170)、活動電位の閾値は平均-40.5±13.8mV(n=59)であった。本年度はラット(成体)節状神経節細胞の分離、培養の条件の決定、ならびにパッチクランプ法による各イオン電流の記録を確立した。

Adult anti-inflammatory drugs (40mg/kg, i.p.) posterior, cerebral corpuscle, nodal ganglion, superior ganglion, cell separation and trypsin (Sigma Type III)50,000U/ml, Collagenase 4mg/ml, approximately 20 minutes after incubation at 37℃, telecentric, secondary Collagenase 4mg/ml, approximately 20 minutes after incubation at 37℃ The cell culture medium was put into a small container (3ml). Cell separation is a microscopical process. After 24 hours, CO_2 will be stored and cultured. The membrane current, resting membrane potential and threshold value of the cell were recorded by using the post-treatment method. In addition, the intracellular and extracellular fluids of different cultures were controlled, and the Na, K, and Ca currents were recorded separately. The results showed that Na current recording was inhibited by 130mM NaCl, 10mM MgCl_2, 7.5 mM TEA, 5mM HEPES, 10 mM glucose in extracellular solution, 130mM CsCl, 20mM TEA, 11mM EGTA, 1mM CaCl_2, 10mM HEPES in intracellular solution, Ca ~(2 +) and K ~(2 +). K currents were recorded in 1μM TTX, 15mM Co^<2+>, modified Tyrode, K-HEPES, and KCl solutions. Ca currents were recorded in 1μMTTX 2.5 mM Ca^<2+>, 5mM EGTA, 10mM Cs-HEPES, and CsCl solutions. The resting membrane potential of nodal neurons averaged-55.4 ± 9.7 mV (n=170), and the threshold value of activity potential averaged-40.5 ± 13.8 mV (n=59). This year, the isolation and culture conditions of adult ganglion cells were determined, and the current recording of each node was established.