頚動脈小体の化学受容器の電気生理学的研究

颈动脉体化学感受器的电生理学研究

• 批准号: 06770023
• 负责人: 三浦 章
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770023/
• 关键词: ラット; 節状神経節; 細胞培養; ホールセルパッチクランプ法; 膜電流; 膜電位

成体ラットをネンブタール麻酔(40mg/kg,i.p.)後、頚動脈小体、節状神経節、上頚神経節を摘出し、細胞分離のためにtrypsin(Sigma TypeIII)50,000U/ml、Collagenase 4mg/mlを含んだハンクス液に入れ、約20分間37℃で培養後、遠心し、次にCollagenase 4mg/mlを含んだハンクス液に入れ、約20分間37℃で培養後、遠心し細胞培養液(ダルベッコ変法イ-グル培地)を入れた小型容器(3ml)に入れた。細胞の分離をよくするために顕微鏡下でパスツールピペットを用いてゆっくりと細胞分離した。その後、CO_2インキュベータ-にて24時間保存し、培養した。その後ホールセルパッチクランプ法を用いてこの細胞の膜電流、静止膜電位、活動電位の閾値を記録した。実験にあたって培養液とは異なる細胞内・外液を作製し、Na、K、Caそれぞれ単独の電流の記録を試みた。その結果Na電流の記録のためには、130mM NaCl、10mM MgCl_2、7.5mM TEA、5mM HEPES、10 mM glucoseを細胞外液に、ピペット内液には、130mM CsCl、20mM TEA、11mM EGTA、1mM CaCl_2、10mM HEPESを用い、Caチャネル、Kチャネルの活動を阻害した。K電流の記録には1μM TTX、15mM Co^<2+>を含む、modified Tyrode液、ピペット内液には、K-HEPESを含むKCl液を用いた。またCa電流記録には1μMTTX 2.5mM Ca^<2+>を含むTEA溶液を細胞外液に5mM、EGTA、10mM Cs-HEPESを含むCsCl液をピペット内液に用いることにした。節状神経節細胞の静止膜電位は平均-55.4±9.7mV(n=170)、活動電位の閾値は平均-40.5±13.8mV(n=59)であった。本年度はラット(成体)節状神経節細胞の分離、培養の条件の決定、ならびにパッチクランプ法による各イオン電流の記録を確立した。

Adult ラットをネ ブタ ブタ ブタ ブタ を 酔 after 酔(40mg/kg,i.p.), 頚 arteriolar bodies, segmental economic segments, upper 頚 economic segments を extract <s:1>, cell isolation <s:1> ためにtrypsin(Sigma TypeIII)50,000U/ml, Collagenase 4mg/mlを containing んだハ <s:1> ス ス ス ス solution に into れ, approximately 20 minutes at 37 ° c で culture, then cardiocentric <s:1>, subに Collagenase 4 mg/ml contains を ん だ ハ ン ク ス liquid に into れ, about 20 points between 37 ℃ で culture, far し after cell culture (ダ ル ベ ッ コ イ - method - グ ル petty) を into れ た small containers (3 ml) に into れ た. Cell <s:1> isolation をよくするために顕 under micromicroscope でパス をよくするために顕 <s:1> た た ピペットを ピペットを ピペットを ピペットを ピペットを using <s:1> てゆっく と と と cell isolation た た After そ そ, CO_2 キュベ キュベ タ タ-にて24 time for storage and culture of <s:1> た. After そ の ホ ー ル セ ル パ ッ チ ク ラ ン を プ method with い て こ の の cell membrane, the resting membrane potential, current activities potential の threshold numerical を record し た. Be 験 に あ た っ て culture と は different な る cells inside, outside liquid を し, Na, K, Ca そ れ ぞ れ 単 の current の record alone を try み た. Youdaoplaceholder0 <s:1> results Na current <e:1> records ために ために ために, 130mM NaCl, 10mM MgCl_2, 7.5mM TEA, 5mM HEPES, 10mM glucoseを extracellular fluid に, ピペット intracellular fluid に, 130mM CsCl, 20mM TEA, 11mM EGTA, 1mM CaCl_2, and 10mM HEPESを use を, Caチャネ チャネ, Kチャネ <e:1> and <s:1> to carry out を damage prevention た. K current の record に は Co ^ 1 mu M TTX, 15 mm < 2 + > を む, modified Tyrode fluid, ピ ペ ッ ト fluid inside に は, K - HEPES を containing む KCl liquid を with い た. ま た Ca current record に は 1 mu MTTX Ca 2.5 mM ^ 2 + > < を containing む TEA solution を extracellular fluid に Cs - 5 mM, EGTA, 10 mM HEPES を containing む CsCl liquid を ピ ペ ッ ト within liquid に with い る こ と に し た. Form the god 経 ganglion cells の resting membrane potential は average 55.4 + / - 9.7 mV (n = 170), activities, potential の threshold numerical は average 40.5 + / - 13.8 mV (n = 59) で あ っ た. This year は ラ ッ ト (adult) form the god 経 ganglion cells の の decided の conditions, were isolated and cultured な ら び に パ ッ チ ク ラ ン プ method に よ る each イ オ ン current の record を establish し た.