低出力レーザーのイオンチャネルへの作用による鎮痛作用機序の解明

阐明低功率激光作用于离子通道的镇痛机制

• 批准号: 07770024
• 负责人: 三浦 章
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770024/
• 关键词: ラット; 節状神経節; 細胞培養; パッチクランプ法; 脱分極; 低出力レーザー; Na^+チャネル

成熟ラットをネンブタール麻酔(40mg/kg,i.p.)後、節状神経節を摘出し、細胞分離のためにtrypsin(Gibco)1.2mg/ml, collagenase(Wako)1.2mg/mlを含むハンクス液に入れ、15分間37℃で処理後、trypsin inhibitorを入れて細胞の崩壊を防いだ後、collagenase(Wako)1.2mg/mlを含むハンクス液に入れ、20分間37℃で処理後、細胞の分離をよくするためにピペッテングした。分離した細胞をハンクス液で2回洗浄後、培養液(DMEM)に移しかえ、CO_2インキュベータ-にて12時間保存し培養した。その後、低出力レーザーを培養細胞に直接照射し、ホールセルパッチクランプ法を用いて細胞膜イオンチャネルへの影響を記録した。低出力レーザー照射(0.006-9J)により、記録した62%の細胞で脱分極を、17%で過分極を認めた。脱分極変化量は0.006-0.036Jの照射では仕事量依存的に増加、それより大きな仕事量では逆に低下し、0.05-9Jでは14mVの一定値であった。静止膜電位の脱分極からの回復は小仕事量群では53%に、大仕事量群では27%に認められ、回復例では脱分極の再現性が認められた。膜電位を-50mVに固定し、レーザー照射(0.016J)すると内向き電流の増加(最大値-230pA)が認められた。この内向き電流は50mM TEAで変化せず、2μM TTXで完全に阻害された。膜電位を-80mVに固定し、脱分極刺激をしたときのレーザー照射(0.012J)によるNa^+電流の電流-電圧関係への影響を検討した。照射後4分において-40から+50mVの範囲の脱分極刺激により照射前と比較して、175%から350%の増大を認めた。照射後6分には、ほぼ照射前のレベルまで回復した。現在、レーザー照射によるNa^+channelの開閉機構に対する作用を詳細に検討する予定である。

在nembutal麻醉（40 mg/kg，i.p.）后，去除结节神经节，用于细胞分离，放置在含有1.2 mg/ml胰蛋白酶（Gibco）的汉克斯溶液中汉克斯的溶液含有1.2 mg/ml胶原酶（WAKO）20分钟，并吸引以改善细胞分离。分离した细胞をハンクス液で2回洗净后、培养液（DMEM）に移しかえ、CO_2インキュベータ-12时间保存し培养した。-12时间保存し培养した。-此后，低功率激光器被直接辐照到培养的细胞上，并对细胞膜膜通道对细胞膜通道的影响进行了对细胞的影响。在62％的记录细胞中观察到去极化，并通过低功率激光照射（0.006-9J）观察到超极化。取决于0.006-0.036J之间的工作量，去极化变化的量增加，并且与更大的工作相比下降，并且在0.05-9J时，其恒定值为14MV。在小型工作组中，在53％的53％中观察到了从去极化中恢复静息膜电位，在大型工作组中恢复了27％，而在回收的病例中观察到去极化的可重复性。当膜电位固定在-50 mV时，激光照射（0.016J）增加了内部电流（最大值-230pa）。该内部电流在50 mM茶中保持不变，并在2μMTTX处完全抑制。当研究膜电位固定为-80mV并研究了去极化刺激时，Na^+电流对激光照射引起的电流 - 电压关系的影响。与辐照前相比，由于去极化刺激的刺激范围为-40至+50 mV，在照射后4分钟观察到175％至350％的增加。辐照六分钟后，温度几乎恢复到辐照之前的水平。目前，我们计划详细研究激光照射对Na^+通道的开放和关闭机制的影响。