細胞分化制御遺伝子を導入した培養血管平滑筋細胞の性質の研究

导入细胞分化控制基因的培养血管平滑肌细胞的特性研究

• 批准号: 06770065
• 负责人: 大見 和広
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770065/
• 关键词: 血管平滑筋分化; E12; α平滑筋型Pクチン; カルデスモン; 転写調筋因子

血管平滑筋細胞の分化制御機構を分子レベルで解明することを目的としてE12遺伝子を導入したラット大動脈由来平滑筋細胞を平成5年度中に確立することができた。今年度はその細胞を用いて平滑筋の分化マーカーであるカルデスモン、α平滑筋型アクチンの発現量をそれぞれの抗体を用いてイムノブロット法で調べた。対照として用いた細胞はラット大動脈中膜平滑筋組織から酵素法により得た細胞を継代培養した細胞を用いた。E12遺伝子はRSVベクターに組み込んでリン酸カルシウム法で継代ラット血管平滑筋培養細胞に導入した。この2種類の細胞から蛋白質を抽出し蛋白量を定量後それぞれ同量を電気泳動し、ニトロセルロース膜に転写し抗体反応を行った。カルデスモン、α平滑筋型アクチンの分子量に相当する部分をPDIデンシトメーターで定量を行った。その結果両者に有意差は見られなかった。また最近、ラットのα1及びβ2アドレナージックレセプターのcDNA塩基配列が報告された。そこで両者に特異的なPCR用のプライマーを作製し2種類の細胞からRNAを抽出して逆転写反応を行いPCR(RT-PCR)を行った。そしてBAS2000を用いて定量化するとα1レセプター発現量/β2レセプター発現量の値が対照細胞では低いのに対しE12遺伝子導入細胞では高いという興味ある知見が得られた。以上の結果から培養血管平滑筋細胞は脱分化しておりE12の発現量を増加させるだけでは分化させるのに十分ではないことがわかった。さらに培養条件を検討することでE12のカウンターパートである平滑筋特異的転写因子の発現量を増加させることが必要と考えられる。

The molecular mechanism of vascular smooth muscle cell differentiation is to understand that the purpose of the vascular smooth muscle cell differentiation control mechanism is to make sure that the smooth muscle cell is established in Pingcheng in the year 5. This year, the cells were differentiated with smooth tendons, and the alpha smooth tendons were measured with antibodies. The medium membrane smooth muscle tissue enzyme method was used to obtain the cell culture method. E12, RSV, tissue tissue, acid, acid, After the amount of protein was extracted, the amount of protein was extracted. After the amount of protein was extracted, the same amount of protein was extracted and the same amount of protein was extracted. After the amount of protein was extracted, the same amount of protein was extracted, and the same amount of protein was extracted. After the amount of protein was extracted, the same amount of protein was extracted. The molecular weight of PDI, alpha smooth gluten, molecular weight, molecular weight and molecular weight. The person who got the results intentionally made a mistake. The most recent, the α 1 and the β 2, the most recent, the α 1 and the β 2, the most recent, the alpha 1 and the β 2, the most recent, the alpha 1 and the β 2. The special PCR of the recipient uses the computer information RNA to select the reverse writing line PCR (RT-PCR) line. The BAS2000 was used to quantify the quantity of α 1, β 2, β 2, and so on. The cell was measured in terms of the cell size, the low temperature, the E12 concentration, and the cell weight. The above results showed that the vascular smooth muscle cells were dedifferentiated, E12, E12 and E12. In terms of conditions, E12, E12.

项目成果

T.Nakayama.: "K252a;a new blocker of the cell-cycle at Giphase in a human hepafoma cell line" Expevientia. 49. 876-880 (1993)

T.Nakayama.：“K252a；人类肝癌细胞系 Giphase 细胞周期的新阻断剂”Expevientia。