EBウイルス抗原による潜在EBウイルス活性化抑制機構の解明

阐明EB病毒抗原抑制潜伏EB病毒激活的机制

• 批准号: 06770225
• 负责人: 清水 則夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770225/
• 关键词: EBV; メタロチオネインプロモーター; LMP1

バ-キットリンバ腫由来Akata細胞は、細胞表面に発現する抗体を抗Ig抗体でクロスリンクする(抗体処理)と潜伏EBウイルスの活性化が起き、ウイルス産生が誘導される。この抗体処理によるシグナル伝達の遮断に働いているEBV抗原の同定をするために、亜鉛イオンにより発現誘導可能なメタロチオネインプロモーターの下流へ、潜伏感染状態で発現する9種類のウイルス抗原の遺伝子をそれぞれ挿入した発現プラスミドを作成した。得られたそれぞれのプラスミドと薬剤抵抗性プラスミドをAkata細胞へ同時に導入し、薬剤選択により両方のプラスミドDNAを保持するクローンを選択した。さらに得られたクローンから、亜鉛処理によりウイルス抗原の発現誘導が起こる細胞クローンを蛍光抗体法により選択した。得られた細胞クローンを12時間亜鉛処理してウイルス抗原の発現を誘導し、亜鉛を除いた後、抗Ig抗体を加えてさらに12時間培養し、どのウイルス抗原誘導でウイルス産生が起こらなくなるのかを蛍光抗体法で調べた。その結果、LMP1を発現している細胞クローンでは、潜伏感染しているEBウイルスの活性化が抑制されることが明らかとなった。この結果は、従来から我々が得ていた結果と矛盾しない。しかし、用いた細胞クローンでは、亜鉛処理によりLMP1の発現は、通常のEBウイルス陽性細胞で発現する量より数倍程度多く発現していた。LMP1は大量に発現すると細胞毒性があることが知られているため、得られた結果がLMP1による細胞毒性を反映していることを否定できない。現在、LMP1の発現量を通常のEBウイルス陽性細胞と同等なレベルにまで落とすための亜鉛処理の条件を検討中である。

Akata cells are treated with antibodies, anti-Ig antibodies, activation of latent EB cells, and induction of EB cell production. The antibody treatment process includes the identification of EBV antigen in the detection of EBV antigen, the identification of EBV antigen in the detection of EBV antigen. In order to obtain the desired gene expression, Akata cells were introduced simultaneously with the desired gene expression, and the desired gene expression was maintained. In addition, it was found that the expression of antigen-induced protein in cells was induced by lead treatment, and the expression of antigen-induced protein in cells was selected by light antibody method. After 12-hour lead treatment, induction of antigen production, addition of anti-Ig antibody, 12-hour incubation, induction of antigen production, and modulation by light antibody method. As a result, LMP1 is expressed in cells, latent infection is inhibited, and activation of EB cells is inhibited. The result of this conflict is contradictory. The expression of LMP1 in cells treated with lead was several times higher than that in normal EB cells. LMP1 is a large amount of cytotoxicity. Now, the production of LMP1 in normal EB cells is under discussion.