ミクロLC/MSを用いた体組織中微量極性物質の検出および同定と法医実務への応用

使用微型 LC/MS 检测和鉴定人体组织中的痕量极性物质及其在法医实践中的应用

• 批准号: 06770331
• 负责人: 稗田 洋子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770331/
• 关键词: テオフイリン; カフェイン; LC; MS; キャピラリーカラム; スクリーニング; 血清; 尿; 固相抽出

高速液体クロマトグラフィー(HPLC)・質量分析計(MS)(LC/MS)を用いたヒト血液および尿中の薬毒物スクリーニング分析法を確立する為の試料精製法、分析方法の検討を行った。MSのイオン化はfast atom bombardment(FAB)法により行い、LCとMS間のインターフェースは、内径55μmのキャピラリーチューブとfritを用いた。MSへの試料導入量は最大5μl/minである為、通常のLCシステムでは注入試料をスプリットしてMSへ導入しなければならない。そこでLCからの試料を無駄なく効率よく導入するために、LCのカラムには内径0.3mmのキャピラリーカラムを用い、さらに濃縮カラムとカラムスイッチングバルブを装着することにより、大量のサンプルの注入をスプリットすることなくMSへ導入することが出来るミクロLCシステムを開発した。このミクロLC/MSシステムにより、従来のLC/MSに比較して格段の高感度分析が可能となった。移動相の組成は、幅広い極性の物質を検出させる為にメタノール勾配によるグラディエント溶離が適していることが判明した。試料の精製は、液-液抽出と固相抽出数種を検討した結果、Extrelutを用いた固相抽出が最も簡便で効率よく薬毒物を回収できることが判明した。これらの抽出および分析条件でどのような物質が実際に検出されるか、ヒト血液および尿を用いて分析を行った。その結果カフェインやテオフィリン等のキサンチン化合物、および脂溶性生体成分等はほとんど全ての試料から本条件で検出されることが明らかになった。キサンチン化合物については7-エチルテオフィリン(合成キサンチン化合物)を内部標準物質(IS)とする定量法が確立できた。その他、向精神薬や睡眠薬等多くの物質が本条件で検出されることが明らかになり、これらをデータベース化することにより、今まで不可能とされてきたLC/MSによる薬毒物スクリーニング分析が確実に実現化できることが明らかになった。

High speed liquid chromatography (HPLC) and mass spectrometry (MS)(LC/MS) were used to establish a method for sample purification and analysis of toxins in blood and urine. MS and MS fast atom bombardment(FAB) method, LC and MS between the fast atom bombardment(FAB) method, the inner diameter of 55μm and the fast atom bombardment (FAB) method. The sample introduction amount of MS is up to 5μl/min, and the sample introduction amount of MS is up to 5 μ l/min. The LC sample has an internal diameter of 0.3 mm and is installed with a large amount of injection. The MS sample is introduced into the LC sample. The LC/MS system can be used to analyze the high sensitivity of the LC/MS system. The composition of the mobile phase, the amplitude of the polar substance, is determined for the purpose of determining the appropriate composition of the mobile phase. Sample purification, liquid-liquid extraction and solid phase extraction are discussed in detail. Extreut extraction is the easiest way to extract toxic substances. The conditions for extraction and analysis of substances are determined by the method of analysis of blood and urine. The results show that all samples are tested under these conditions. The quantitative method for the determination of the internal standard substance (IS) of a synthetic compound is established. The analysis of toxic substances such as other substances, psychotropic substances and sleep substances under these conditions is not possible.

项目成果

Yoko Hieda: "Highly sensitive and rapid determination of theophyline, theobromine and caffeine in human plasma and urine by gradient capillary high-performance liquid chromatography-frit-fast atom bombardment mass spectrometry" Journal of ChromatographyB

Yoko Hieda：“通过梯度毛细管高效液相色谱-快速熔块原子轰击质谱法高灵敏度快速测定人血浆和尿液中的茶碱、可可碱和咖啡因”《色谱杂志》B