温度感受性変異株tsFT101細胞の温熱耐性および熱ショック蛋白誘導の解析

温度敏感突变体tsFT101细胞的热耐受性和热休克蛋白诱导分析

基本信息

  • 批准号:
    06857008
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.77万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

細胞レベル・DNAレベルの温度受容、温熱耐性の機構解明の糸口として、マウス乳ガン由来のFM3A細胞から分離された温度感受性変異株tsFT101細胞に着目した。この細胞は、33℃では正常の細胞分裂がおこり増殖するが、39℃では減数分裂は正常におこるものの、細胞質分裂が特異的に阻害されるため、細胞が多核化するという温度依存性の特性を有する。温度感受性変異株の熱耐性と熱ショック蛋白(hsp)誘導の検討から温度感受性変異の機構を検討することを本年度の研究目的とした。FM3A細胞および温度感受性変異株であるtsFT101細胞を、37℃および39℃に設定した2器の炭酸ガス培養器(5%CO_2)を用いて浮遊培養した。tsFT101細胞を33℃から39℃の各温度にて培養し、増殖率および多核細胞率を検討したところ、増殖率は37℃にピークを有す上に凸の曲線を呈した。また、33℃から38℃までは多核細胞はほとんど認めず(数%以下)、39℃ではじめて増加(60%以上)した。細胞レベルの温熱耐性をコロニー・フォーメーション・アッセイにて検討した。tsFT101細胞は、FM3A細胞にくらべ、37℃・39℃両条件下とも、温熱高感受性(低耐性)であった。45℃15分間の熱処理によりFM3A細胞では熱耐性が誘導されたが、39℃培養tsFT101細胞では、ほとんど熱耐性の誘導を認めなかった。また、同様の熱処理をした細胞から蛋白を可溶化・抽出し、電気泳動後抗hsp70抗体を用いてウエスタン・ブロッティングを行い、熱ショック蛋白(hsp70)の発現を検討した。構成型のhsp72は、いずれの細胞でもほぼ同様に発現していたが、誘導型hsp70の誘導はFM3A細胞では見られたものの、39℃培養tsFT101細胞では、極わずかであり、この結果は、温熱耐性の誘導結果と一致した。今後、この細胞を用いて、熱ショック蛋白と温熱耐性との関係、さらには、この細胞の温度感受性変異の機構の解明を目指して行きたい。
The mechanism of temperature tolerance and temperature tolerance of cell DNA was studied by FM3A cell and FT101 cell. The cells are resistant to normal cell division at 33℃ and to meiosis at 39℃. To investigate the mechanism of thermotolerance and thermotolerance of thermosensitive plants (hsp), the objective of this study was to investigate the mechanism of thermosensitive plants (hsp). FM3A cells were incubated in a 5%CO_2 incubator at 37℃ and 39℃. tsFT101 cells were cultured at 33℃ to 39℃, and the growth rate and multinucleated cell rate were measured at 37℃. Polykaryocytes at 33 ° C and 38 ° C were found to be more than 60%. The heat tolerance of cell nuclei is investigated by using the Konna·FU ー ーン·ンン. tsFT101 cells, FM3A cells, 37℃, 39℃, high temperature sensitivity (low tolerance) Heat treatment at 45℃ for 15 min induced heat tolerance in FM3A cells, and heat treatment at 39℃ induced heat tolerance in tsFT101 cells. The development of anti-hsp70 antibodies after heat treatment and electroporation was discussed. The results of constitutive hsp72 cells and inducible hsp70 cells were consistent with those of TsFT101 cells cultured at 39℃. In the future, the relationship between the use of heat and heat tolerance in these cells, and the understanding of the mechanism of temperature sensitivity in these cells will be discussed.

项目成果

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