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小胞体内タンパク質分解機構のin vitro再構成に関する研究

内质网蛋白降解机制的体外重建研究

基本信息

批准号：
07771665
负责人：
坂井英昭
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771665/
关键词：
小胞体タンパク質分解カテプシンE

项目摘要

細胞内で合成され最終的に分泌されたり,リソゾームや細胞膜に局在するタンパク質は,細胞質の遊離リボソームで合成されその翻訳の極めて初期に小胞体に輸送される.小胞体内タンパク質分解機構をin vitroにおいて再構成する際に,この輸送過程の効率は最も重要となる.本年度の前半は,細胞質から小胞体へのタンパク質輸送を制御するタンパク質の一つNAC(Nascent-polypeptide Associated Complex)の生化学的な特徴付けとその機能の解析を行った.その結果NACはリボソームから露出した短いポリペプチド鎖に結合し,それを非特異的なタンパク質分解から保護することを見いだした.(J.Cell Biol.130(3);519-528,1995).さらに,NACを欠乏させた条件ではシグナルペプチドの有無にかかわらずあらゆるタンパク質が小胞体に輸送されてしまうが,SRP(Signal Recognition Particle)とNACの存在下ではじめて正しい小胞体へのタンパク質輸送が行われることを見いだした(Proc.Natl.Acad.Sci.92;5411-5415,1995).本年度後半では,小胞体内タンパク質分解の基質として用いる目的で,エンドゾーム・小胞体局在性のアスパルティックプロティナーゼであるカテプシンEの変異体の作製を行った.カテプシンEの野生型は分子量約43kDaの糖タンパク質2つがS-S結合(分子内のシステイン残基由来)で結合したホモダイマーである.分子内のシステイン残基をアラニンに置換した変異体はダイマー形成ができず,野生型に比べて中性pH下で極めて早く失活することを見いだした(J.Biochem.119;126-134,1996).

The final secretion of intracellular synthesis, the release of proteins, and the transport of proteins in the membrane, the release of proteins in the cytoplasm, and the transport of proteins in the early stages of intracellular synthesis. The efficiency of the transport process is most important when the mass decomposition mechanism in the cell is reconstructed in vitro. In the first half of this year, the biochemical characteristics and functional analysis of NAC(Nascent-polypeptide Associated Complex) were carried out. As a result, NAC has a non-specific quality decomposition mechanism. (J.Cell Biol.130(3);519-528,1995). In addition,NAC is not available under the condition that SRP(Signal Recognition Particle) is present in the presence of NAC (Proc. Natl. Acad. Sci. 92;5411- 5415, 1995). In the second half of the year, the matrix of the cell mass decomposition was used for the purpose of production and production. The wild-type protein has a molecular weight of about 43kDa and is bound to S-S (origin of intramolecular residues). The amino acid residues within the molecule are replaced by heterogeneic residues, which are inactivated much earlier at neutral pH than wild type (J. Biochem. 119;126- 134, 1996).