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破骨細胞の死を遅延させるTNFスーパーファミリータンパク質の機能発現様式

TNF超家族蛋白延缓破骨细胞死亡的功能表达模式

基本信息

批准号：
10771017
负责人：
坂井英昭
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

破骨細胞はストローマ細胞と接触しており、細胞間の接触は破骨細胞の形成、骨吸収活性の維持、延命において重要であることが指摘されてきた。そこに関わる因子は今まで不明であったのだが、近年、ストローマ細胞に発現している膜結合型TNFスーパーファミリータンパク質であるODF(破骨細胞分化因子)が、その本体であることが発見された(Yasuda et al.1998)。我々は、このODFのストローマ細胞での発現様式を知るために、ODFの検出システムを構築した。システムの概要は、ODFのおとり受容体であるosteoprotegerin(OPG)をビーズに固相化し、ODFをOPGと結合させた状態で沈降させ、SDS-PAGEで展開後にODFを特異抗体を用いたWestern blottingで検出するものである。OPGはC-末端にヒスチジンタグ(His6)を付加したリコンビナントタンパク質としてバキュロウィルスで発現・調製したものを用いた(OPG-His6)。ストローマ細胞であるST2細胞をvitaminD3とdexamethazoneで処理すると、ODFの産生が認められ、培地の交換をしない場合、48時間後にピークを示した。このとき、存在量はわずかであるが遊離型のODFも認められた。一方、新生マウス頭蓋骨由来の骨芽細胞様細胞をvitaminD3とprostaglandinE2で処理すると、やはり時間依存的にODFの産生が認められた。骨芽細胞様細胞の場合、dexamethasoneよりprostaglandinE2がODF産生に対しては有効であった。ST2細胞の場合と異なり、遊離型ODFの産生はほとんど認められなかった。ところが、細胞をホルボルエステル(PMA)とionomycin処理すると、遊離型ODFを産生した。このことから、プロテインキナーゼC依存的な遊離型ODF産生機構の存在が予測された。

Osteoclast cell contact, cell-to-cell contact, osteoclast formation, maintenance of bone resorption activity, and life extension are important. In recent years, membrane-bound TNF (osteoclast differentiation factor) has been developed in cells, and ODF(osteoclast differentiation factor) has been developed in vitro (Yasuda et al.1998). We have to build a system of ODF for cell development. ODF receptor profile, ODF receptor profile, ODF receptor profile, OPG is a C-terminal control system (His6). ST2 cells were treated with vitaminD3 and dexamethazone, and ODF was produced after 48 hours. There is no doubt that there is no doubt that the ODF is free. A new bone bud cell derived from the skull is vitaminD3 and staglandinE2, and the production of ODF depends on time. Bone bud cells, dexamethason, prostaglandin E 2, ODF generation The situation of ST2 cells is different, and the production of free ODF is not recognized. The cells were treated with PMA and free ODF. The existence of C-dependent dissociative ODF generation mechanisms is predicted.