破骨細胞に特異的に発現する遺伝子のクローニング
破骨细胞特异性表达基因的克隆
基本信息
- 批准号:07771670
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1995
- 资助国家:日本
- 起止时间:1995 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究は、破骨細胞に特異的に発現するmRNAをクローニングし、その塩基配列を決定することを目的として行なわれ、これまでにつぎの研究成果を得た。破骨細胞はマウス長管骨より分離する予定であったが、骨質が硬くハサミによる細切が困難だったため、19日齢鶏胚の長管骨を用いた。骨片からの破骨細胞の分離は、Tezukaらの方法(Biochem Biophys Res Commn 186: 911-, '92)に改良を加えて下記の順で行った。原法に従って骨片から得た破骨細胞を含む細胞浮遊液をメッシュサイズ25μmのふるいでろ過して小型の細胞を除き、メッシュ上に残った大型の細胞を20時間培養した後pronase E処理して破骨細胞以外の細胞を培養皿から除いた。酵素消化は細胞を光学顕微鏡で観察しながら行い、破骨細胞のみを培養面に残すようにした。このようにして、直径90mmの培養皿あたり約100個の破骨細胞を得た。今後はこれまでにストックした破骨細胞からtotal RNAを分離し、differential display法(Liang et al., Science, 257: 967-, '92)で破骨細胞に特異的に発現するmRNAをクローニングし、塩基配列の決定を行う。実験計画では、破骨細胞の対照として脾細胞を用いる予定であったが、文献的に原法では偽陽性率が高いことが指摘されているため、カルチトニン処理、副甲状腺ホルモン処理した破骨細胞を対照とすることにより破骨細胞の特異的機能に関連した遺伝子のクローニングを目指す予定である。
The results of this study were obtained by determining the expression of mRNA specific to osteoclasts. The osteoclast cells were isolated from the long tubular bone, and the bone was hard and difficult to cut. The method of separating osteoclasts from bone slices (Biochem Biophys Res Commn 186: 911-,'92) was improved by adding the following notes. The original method was to obtain osteoclasts from the culture medium containing 25μm cells, and to remove small cells from the culture medium containing 25μm cells. Enzymes digest cells and observe them with optical microscopy, and osteoclast cells remain in culture. About 100 osteoclasts were obtained from 90mm diameter culture dishes. In the future, osteoclast total RNA isolation and differential display methods (Liang et al., Science, 257: 967-,'92) allows osteoclast-specific mRNA to be processed and determined by gene allocation. In this study, the authors reported that the false positive rate of osteoclast irradiation and spleen cell irradiation was high in the literature, and the correlation between osteoclast specific function and spleen cell irradiation was high in the literature.
项目成果
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