運動ニューロン栄養因子を発現する筋由来メッセンジャーRNAの分画

表达运动神经元营养因子的肌肉源性信使 RNA 的分离

• 批准号: 04670087
• 负责人: 樫原 康博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670087/
• 关键词: 運動ニューロン; 細胞死; 栄養因子; 培養; 卵母細胞; 筋; メッセンジャーRNA; 鶏胚

胎生期に運動ニューロンは自然に多数死滅する。この自然細胞死期の運動ニューロンの生存は、筋力から放出される栄養因子に依存すると仮定されている。しかし、この因子は未だ同定されていない。本研究は、筋のメッセンジャーRNA(mRNA)を抽出し、この翻訳蛋白がin vivo,及びin vitroの運動ニューロンの生存を促進するか、もしそうなら、どのサイズのmRNAが生存活性が高いかを検討することを目的とした。この目的のために、運動ニューロン自然細胞死期の鶏胚より下肢筋を摘出し、mRNAを抽出した。このmRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入飼育し、飼育液中に分泌される翻訳蛋白を鶏胚卵に投与したところ、運動ニューロンの自然細胞死が阻止された。次のこの細胞死阻止が、in vitroの運動ニューロンでも見られるかを検討した。この目的のために、自然細胞死期の運動ニューロンを鶏胚から単離し、翻訳蛋白を含む液で培養したところ、生存率が無投与群に比べ有意に増大した。次に、mRNAを蔗糖密度勾配遠心法により5分画し、それぞれの分画のmRNAの翻訳蛋白をこの培養運動ニューロンに投与した。その結果、18Sと28Sの間の分画のmRNAの翻訳蛋白投与群に生存率の上昇がみられた。この生存率と分画前のmRNAによる生存率との比較より、蔗糖勾配密度遠心分画で約10倍、生存活性を持つmRNAを濃縮したと推定できた。現在、この18Sと28Sの分画mRNAのcDNAライブラリーを京都大学医学部中西研究室との共同で作成中である。

Movements in the prenatal period This natural cell death cycle is dependent on the release of trophic factors such as muscle and muscle. The factors are not the same. This study aims to investigate the high activity of RNA(mRNA) in vivo and in vitro in promoting survival of exercise animals. The purpose of this exercise is to extract the mRNA from the lower limb tendon. This mRNA is injected into the oocyte and secreted into the culture medium to prevent the natural cell death of the embryo. The second time the cell is dead, in vitro, the movement of the cell is blocked, and the cell is blocked. For this purpose, the natural cell death rate, embryo growth rate, protein growth rate and survival rate increased significantly compared with those of the control group. In addition, mRNA and sucrose density are closely related to each other, and the mRNA and protein are closely related to each other. The results showed that there was an increase in survival rate between 18S and 28S mRNA and protein expression. The survival rate was about 10-fold higher than that of pre-assay mRNA, and the survival activity was about 10-fold higher than that of pre-assay mRNA. Now, the cDNA of the mRNA of 18S and 28S is jointly produced by the Laboratory of Chinese Medicine and Western Medicine, Kyoto University.

项目成果

INAISHI,Y.: "Co-operative regulation of calcitonin gene-related peptide levels in rat sensory neurons via their central and peripheral processes." J.Neurosci.12. 518-524 (1992)

INAISHI,Y.：“通过中枢和外周过程协同调节大鼠感觉神经元中降钙素基因相关肽的水平。”

SAKAGUCHI,M.: "Motor nerve degeneration enhances the expression of calcitonin gene-related peptide in rat dorsal root ganglion cells." Neurosci.Lett.137. 61-64 (1992)

SAKAGUCHI,M.：“运动神经变性增强了大鼠背根神经节细胞中降钙素基因相关肽的表达。”