メッセンジャーRNAを標的としたジストロフィン異常の分子遺伝学的研究

针对信使 RNA 的抗肌营养不良蛋白异常的分子遗传学研究

• 批准号: 06670792
• 负责人: 松尾 雅文
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670792/
• 关键词: ジストロフィン; メッセンジャーRNA; スプライシング; Duchenn型筋ジストロフィー

Duchenne型筋ジストロフィーは最も頻度の高い遺伝性筋疾患で、出生3500人の男児に1人が発症する。Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)はジストロフィン遺伝子の異常により発症することが明らかにされたが、ジストロフィン遺伝子が、巨大なため、患者の約5割のみで、しかも比較的大きな遺伝子の異常しか明らかにされていない。本研究はジストロフィン遺伝子で微細な異常を効率よく解析するために、巨大な遺伝子そのものを解析試料とせず、サイズが100分の1以下になる転写産物(メッセンジャーRNA)を解析することにより効率よくし、しかも点突然変異等の微細な異常を明らかにしようとするものである。今回、従来の方法ではジストロフィン遺伝子に遺伝子異常が発見されなかったDMD患者を対象として、白血球中のジストロフィンメッセンジャーRNA(mRNA)のRT‐PCR解析を行なった。方法は、まずジストロフィンmRNAを逆転写酵素によりcDNAに変換し、さらに重複PCR法を行なうものである。その結果、1例では遺伝子欠失のホットスポットとされる領域で正常より小さなサイズの増幅DNAを得た。この結果は、ジストロフィン遺伝子のスプライシングの異常を示唆するもので、現在その増幅断片の塩基配列を決定しつつある。また、他の1例ではシスチンリッチ領域でサイズの小さな増幅断片を得た。この増幅断片についても塩基配列を決定しつつある。これらの異常はいずれもmRNAを解析することのみにより発見が可能で、今回確立した方法がジストロフィン異常症において有効な遺伝子異常発見手段であることを示した。

Duchenne type muscle disorder is the most common type of muscle disorder, occurring in one male out of 3500 births. Duchenne type muscle tendon (DMD) is the most common type of muscle in the body. In this study, we analyzed the micro-anomaly rate, the macro-anomaly rate and the micro-anomaly rate. The present and future methods are to analyze RNA(mRNA) in DMD patients by RT-PCR. Methods: Reverse transcription of mRNA, reverse transcription of cDNA, and repeat PCR were used. The results were as follows: 1. DNA amplification was obtained in the normal domain. The results of this study are as follows: 1. The distribution of the abnormal information in the distribution of the abnormal information. The first example of this is to increase the size of the field. The size of this fragment is determined by the size of the matrix. The method of detecting abnormal mRNA expression is established. The method of detecting abnormal mRNA expression is established.

项目成果

Nishio, H.: "Identification of a novel first exon in the human dystrophin gene and of a new promoter located more than 500 kb upstream of the nearest known promoter." J. Clin. Invest.94. 1037-1042 (1994)

Nishio, H.：“鉴定了人类肌营养不良蛋白基因中的一个新的第一个外显子，以及一个位于最近的已知启动子上游 500 kb 以上的新启动子。”

Kitoh, Y.: "Amplification of selected exons by polymerase chain reavtion enables determination of the translational reading frame of dystrophin mRNA." Kobe. J. Med. Sci.40. 39-48 (1994)

Kitoh, Y.：“通过聚合酶链反应扩增选定的外显子，能够确定肌营养不良蛋白 mRNA 的翻译阅读框。”

Hagiwara,Y.: "A novel point mutation(G-1 to T)in a 5′splice donor site of intron 13 of the dystrophin gene results in exon skipping and is responsible for Becker muscular dystrophy." Am.J.Hum.Genet.54. 53-61 (1994)

Hagiwara, Y.：“抗肌营养不良蛋白基因 13 号内含子的 5 剪接供体位点中的一个新点突变（G-1 到 T）导致外显子跳跃，并导致贝克尔肌营养不良症。”基因.54。53-61（1994）

Takesima,Y.: "Amino‐terminal deletion of 53% of dystrophin results in an intermediate Duchenne‐Becker muscular dystrophy phenotype." Neurology. 44. 1648-1651 (1994)

Takesima, Y.：“53% 的肌营养不良蛋白氨基末端缺失导致中间型杜兴-贝克尔型肌营养不良症表型。神经病学。” 44. 1648-1651 (1994)