G蛋白質によるアラキドン酸カスケード制御機構の解明

阐明G蛋白的花生四烯酸级联控制机制

• 批准号: 07772211
• 负责人: 須賀 比奈子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Institute of Psychiatry
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772211/
• 关键词: 細胞質ホスホリパーゼA_2; Gタンパク質; プラスタグランジンE_2; アフリカツメガエル卵母細胞

[方法](1)アフリカツメガエル卵母細胞に、各種の受容体、Gタンパク質、及び細胞質ホスホリパーゼA_2(cPLA2)のcRNAを注入し、発現させた。細胞を刺激して、遊離したプロスタグランジンE_2(PGE2)の濃度を測定した。また、細胞を破砕後、遠心し、上清及び沈殿のPLA2活性を測定した。(2)以下の改変cDNAを作製し、上と同様の実験を行った。(i)cPLA2cDNAのHind III部位(1798)に終止コドンを挿入(ii)cPLA2cDNAのKpn I部位(1078)からHind III部位(1798)までを削除(iii)cPLA2cDNAのSac I部位(1555)からHind III部位(1798)までを削除[結果](1)cPLA2 cRNAを注入した卵母細胞の上清のPLA2活性は、0.1nmo1/min/mgだった。注入しない場合には、活性はほとんどなかった。改変cPLA2 cRNAを注入した場合の活性は、野生型の場合より低かった(2)M_2ムスカリン性アセチルコリン受容体(M_2mAChR)と、G_<i3>α又はG_oα又はG_zαと、cPLA2を発現させた場合、アセチルコリン刺激でPGE2の遊離が上昇した。Gタンパク質として、G_<il>α又はG_<i2>α又はG_sαを用いた場合は、上昇しなかった。これらの結果から、M_2mAChR-G_<i3>α,G_oα,G_zα-cPLA2という情報伝達系が存在することがわかった。また、ブラジキニン受容体又はδ-オピオイド受容体と、G_<i3>αと、cPLA2の組合せでも、ブラジキニン又はエンケファリン刺激でPGE2遊離が上昇した。(3)M_2mAChRと、G_<i3>αと、改変cPLA2を発現させた場合、細胞を刺激しても遊離PGE2の上昇はみられなかった。

[Methods](1) cRNA was injected into oocytes and recovered from oocytes in various recipients, cytoplasm and cytoplasm. The concentration of E_2(PGE2) was determined after cell stimulation. PLA2 activity was measured in the supernatant, supernatant and supernatant after cell lysis. (2)The following changes in cDNA are made, and the same is true. (i) The termination point was inserted at Hind III site (1798) of cPLA2 cDNA (ii) The Kpn I site (1078) of cPLA2 cDNA was deleted at Hind III site (1798)(iii) The Sac I site (1555) of cPLA2 cDNA was deleted at Hind III site (1798)[Results](1) The PLA2 activity in the supernatant of oocytes injected with cPLA2 cRNA decreased by 0.1 nmo1/min/mg. In case of injection, the activity is higher. The activity of cPLA2 cRNA was decreased when it was injected into the wild type and decreased when it was injected into the wild type. The activity of PGE2 was increased when M_2 <i3>was stimulated by G_0 α and G_2 α. G_<il>α is opposite to G<i2>_ α and G_s is opposite to G_α. M_2mAChR-G_<i3>α,G_oα,G_zα-cPLA2 PGE2 <i3>free rise in response to the combination of G_ α and cPLA2. (3)M The <i3>expression of cPLA2 in cells was stimulated by G_2ChR and G_2ChR.