权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

7回膜貫通型オーファン受容体とG蛋白質との融合蛋白質を用いた新規リガンドの探索

使用 7 次跨膜孤儿受体和 G 蛋白的融合蛋白寻找新配体

基本信息

批准号：
12771393
负责人：
須賀比奈子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

1 G蛋白質共役受容体のリガンド探索法として、受容体とG蛋白質G16のαサブユニット(G16α)との融合蛋白質をCHO細胞に発現させ、融合させたG16αを介した細胞応答(細胞内Ca^<2+>上昇及びプロスタグランジンE_2(PGE2)産生)を測定することにより、簡便に大量のリガンド候補物質の検索ができる方法を開発した。この方法は、リガンド検索に使い易い方法がないGi共役受容体に特に適しており、受容体とG16αを共発現させる方法よりも感度が高い。Gi、Gq及びGs共役受容体で適用可能なため、共役するG蛋白質の予測が困難なオーファン受容体にも有用である。Gs又はGi共役受容体の場合、導入した受容体のサブタイプが細胞に内在性に存在しても、G16αを介する細胞応答のみを観測できるため、サブタイプ特異的リガンド探索にも適している。具体的には、Gi共役受容体(CX3Cケモカイン受容体(CX3CR)、m2ムスカリン受容体)の場合、受容体単独発現では、アゴニスト刺激に伴う細胞応答はほとんど見られなかったが、融合蛋白質では、著しい細胞応答が観測され、融合させたG16αとの共役が示された。また、融合蛋白質では、受容体とG16α共発現より感度が高く、共発現では観測し難い場合でも著しい細胞応答を観測でき、G16αとの共役効率が高いことが示唆された。Gq共役受容体(ウロテンシンII受容体(UIIR)、m1ムスカリン受容体)の場合、受容体単独で大きい細胞応答が観測されたが、融合蛋白質では、受容体単独や共発現と同程度か、さらに大きい細胞応答が観測された。2 CX3CR-G16α融合蛋白質のPGE2産生に関与する分子種を明らかにした。3 UIIRの新規リガンド(ペプチド1種、低分子3種)を同定した。4 オーファン受容体(新規12種、既知11種)をcDNAクローニングした。上述の方法を用いてリガンド探索を行う予定である。

A simple and convenient method for the detection of a large number of G protein candidate substances was developed for the detection of a fusion protein between a receptor and G protein G16 α (G16α) in CHO cells mediated by the fusion of G16 α and the cellular response (intracellular Ca^2+> increase and G protein E_2(PGE2) production). This method is highly sensitive to the detection of Gi co-active receptors and G16α co-active receptors. Gi, Gq and Gs co-receptor are applicable to the prediction of G protein. Gs are also suitable for situations where Gi works with the receptor, the intrinsic existence of the receptor's receptor in the cell, the sensitivity of the cell's response mediated by G16α, and the unique exploration of the receptor. Specific Gi co-active receptors (CX3CR, m2 co-active receptors), receptor independent development, non-stimulation associated with cellular response, fusion protein, fusion protein, cell response, fusion protein G16 alpha co-active. The sensitivity of fusion protein and receptor G16α co-expression is high, and the co-expression of G16α is high. In the case of Gq co-receptor (UIIR, m1 co-receptor), the receptor alone is detected in large cells, the fusion protein is detected in small cells, and the receptor alone is detected in large cells. 2 CX3CR-G16 α fusion protein and the molecular species involved in PGE2 production 3 UIIR's new regulations (1 species, 3 species of low molecular weight) are the same 4. The cDNA library contains 12 new and 11 known receptors. The above methods are used to explore the future.