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プロテオグリカン型チロシンホスファターゼの活性調節機構

蛋白多糖型酪氨酸磷酸酶活性的调控机制

基本信息

批准号：
07780551
负责人：
前田信明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

中枢神経特異的コンドロイチン硫酸プロテオグリカンである6B4プロテオグリカンは、受容体型チロシンホスファターゼPTPζの細胞外ドメインに相当する分子である。本研究では、6B4プロテオグリカン及びPTPζの関与する情報伝達系を明らかにする目的で、本分子のリガンド及び基質分子の検索を行った。ラット脳ミクロソーム画分のCHAPS抽出物を6B4プロテオグリカン-セファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより分画し、6B4プロテオグリカン結合蛋白質を精製した。その結果、18,28,40-kDaの三種のリガンドが同定された。これらの分子のN-末端アミノ酸配列を気相プロテインシクエンサーを用いて解析したところ、18-kDa の蛋白質は、heparin-binding growth associated molecule と同定された。28,及び40-kDa蛋白質については、N末端プロッキングのため解析不能であった。現在、CNBr分解産物について解析中である。また、PTPζの基質分子の同定のために本分子のホスファターゼドメインとGTSとの融合蛋白質を作製した。この融合蛋白質に結合する蛋白質をラット脳抽出物より精製し、70-kDa蛋白質が、PTPζの細胞内ドメインに結合することが明らかになった。現在、本蛋白質の同定及びチロシン燐酸化の有無を解析中である。今後、PTPζへのリガンド結合が70kDa蛋白質のPTPζとの結合及び酸化状態に影響を及ぼすかどうかを検討する予定である。

The central neuro-specific gene expression is called the 6B4 gene expression, and the receptor gene expression is called the PTP gene expression. The purpose of this study is to clarify the relationship between PTP and 6B4, and to explore the molecular structure and matrix. CHAPS extract from the sample was purified by HPLC. As a result, three kinds of 18, 28, 40-kDa proteins were identified. The N-terminal amino acid sequence of the molecule was determined by the analysis of 18-kDa protein and heparin-binding growth associated molecule 28, and 40-kDa proteins can not be resolved. Now, CNBr decomposition products are analyzed. The fusion protein of PTP and GTS was prepared by the same method. The fusion protein binds to the protein extract, purified, 70-kDa protein, PTP and intracellular protein binding. Now, the protein identity and the presence or absence of phosphorylation are analyzed. In the future, the binding of PTP protein to 70kDa protein and the effect of acidification on PTP protein binding will be discussed.