出芽酵母のサイクリン依存性プロテインキナーゼインヒビター・Pho81pの作用機構

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂Pho81p在酿酒酵母中的作用机制

• 批准号: 07780602
• 负责人: 小川 暢男
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780602/
• 关键词: 出芽酵母; 信号伝達; CDK; CDKインヒビター; two-hybrid; 高コピー数サプレッサー; 膜タンパク質

細胞周期制御ではサイクリン-サイクリン依存性プロテインキナーゼ(CDK)複合体の活性制御が中心的役割を果たしている。培地中の無機リン酸濃度で発現が制御される出芽酵母のPHO5遺伝子の発現制御機構はサイクリン-CDKを介した信号伝達系であり、そのキナーゼ活性はPho81pと名付けられたアンキリンタイプのCDKインヒビターにより阻害される。以前の解析において、このタンパク質はその中央部に最小機能ドメイン、N末領域に負の制御ドメインそしてC末領域に正の制御ドメインの3機能領域に分割できることを明らかにしたが、その際このタンパク質のリン酸信号による活性化が量的変化か質的変化かが不明であった。今回、PHO81プロモーターをリン酸信号に関わらず一定の発現量のプロモーターに取り替える実験を行い、中央部の必須機能ドメインだけでも質的変化が生じていることが分かった。一方、そのN末およびC末の制御ドメイン間のin vivoでの相互作用もtwo-hybrid法により検出している。in vitroにおける各ドメイン間の相互作用については解析が進行中である。次に、そのPho81pの活性を制御する他の因子を取得する目的で、PHO81に対する高コピー数サプレッサー遺伝子をスクリーニングしたところ、PHO86とPHO88(=YBR106w)が得られた。それらの分子遺伝学的解析の結果、これらの遺伝子は共にリン酸取り込みに関与する膜タンパク質をコードしていることが分かり、膜に存在するリン酸取り込み系からPho81pへのリン酸信号の流れが示唆される。

Cell cycle regulation is dependent on the activity of the CDK complex. The concentration of inorganic linic acid in the culture medium can be detected and controlled. The detection and control mechanism of the PHO5 gene of budding yeast is connected to the signal transmission system of SIKELIN-CDK, and the activity of the common KINAKIRAI is hindered by the CDK INKINAKIRAI activity of Pho 81p. In the previous analysis, the central part of the system was divided into three functional areas, namely, the negative control area, the negative control area, the positive control area, and the negative control area. This time, PHO81 has a certain amount of detection and selection, and the central part has a necessary function. The interaction between the two components in vivo and the two-hybrid method In vitro, the interaction between the various elements is in progress. Second, the activity of Pho81p is controlled by other factors, such as PHO81, PHO 86 and PHO88(=YBR106w). As a result of molecular genetic analysis, the protein has been found to be related to the presence of Pho 81p and the flow of Pho 81p signal.