シグナルモジュレーター蛋白質(14‐3‐3)の機能ドメインと標的分子の同定

信号调节蛋白功能域和靶分子的鉴定(14-3-3)

基本信息

  • 批准号:
    07780697
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

14‐3‐3タンパク質(以下14‐3‐3)は、細胞のシグナル伝達系、とりわけ蛋白質キナーゼを介した情報伝達経路に深くかかわっていることが知られている。しかしながら、14‐3‐3の一次構造の内、どの領域(どのドメイン)がその機能に重要であるのか、ほとんど知られていない。また14‐3‐3のシグナル伝達系での役割は独立したものなのか、或いは細胞内では互いにクロストークし合っているのか、さらには今日知られていない機能が存在するのか等、依然多くの点が明らかにされていない。そこで本研究では(1)一部のアミノ酸配列を欠損或いは変異させた組換え型14‐3‐3を用いて、14‐3‐3の構造の内、どの領域がその機能に重要であるのかを決定する、(2)14‐3‐3の脳神経系での標的蛋白質を検出し、それらを機能別に整理することを目的に研究を行った。(1)の研究では、大腸菌で発現した14‐3‐3が天然の14‐3‐3と同様のトリプトファン水酸化酵素(以下TPH)活性化能を有することを示した後、この組換え型蛋白質を用いて14‐3‐3分子内の機能領域(boxIと命名;約40アミノ酸から成る)を同定、boxIがTPHに対する結合部位であることを報告した。また、この領域は、Raf‐1などとも結合する14‐3‐3に本質的な機能単位であることを推定した(結果の一部はJ.Biol.Chem.に報告)。また、(2)の実験では、組換え型14‐3‐3を不溶化したゲルを調製し、これを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、ラット脳抽出液中の14‐3‐3結合蛋白質の分離を試みた。その結果、ラット脳抽出液中の蛋白質で14‐3‐3ゲルに結合してくる脳蛋白質が、TPH以外に少なくとも30種類存在していることが分かった。現在、反応スケールを大きくすることで、これらの蛋白質を実際に分離し、既知蛋白質か、未知蛋白質かを解析している。今後は、これらの標的蛋白質を総合的に解析し、14‐3‐3のシグナル伝達系での役割を整理していきたいと考えている。
14 ‐3‐3 The inner and outer regions of the primary structure (14‐3‐3) are important for their functions. The 14 - 3 - 3 system is independent, or intracellular, but it is known that the function exists today, and so on. This study is aimed at (1) determining the functional importance of the structure of 14 - 3 - 3,(2) identifying the target protein of 14 - 3 - 3- (1)This study shows that the activity of the enzyme 14 - 3 - 3 and the natural enzyme 14 - 3 - 3 are similar to that of the TPH, and that the functional domain of the protein 14 - 3 - 3 molecule (box I) is similar to that of the TPH binding site. The functional unit of the essence of the domain is estimated by the combination of the domain and the domain (part of the results is reported by J. Biol.Chem.). The separation of 14 - 3-bound proteins from the extract was studied. As a result, the protein in the extract was 14 - 3 - 3, and the protein was only 30 species other than TPH. Now, the protein is isolated in real time, known protein is analyzed, unknown protein is analyzed. In the future, the target protein will be integrated into the analysis, 14 - 3 - 3

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
礒辺俊明: "14‐3‐3のシグナリング-蛋白質キナーゼのモデュレーターとしての14‐3‐3" 羊土社, 6 (1995)
Toshiaki Isobe:“14-3-3 - 14-3-3 作为蛋白激酶调节剂的信号传导”Yodosha,6 (1995)
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  • 资助金额:
    $ 0.64万
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