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ドーパミンニューロンを特異的に活性化する新しい栄養因子の精製・同定

特异性激活多巴胺神经元的新营养因子的纯化和鉴定

基本信息

批准号：
07780744
负责人：
藤本一朗
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

中枢のドーパミンニューロン系に特異的に作用する栄養因子が神経回路障害時に増加することが明らかとなってきた。しかし、その蛋白の同定はまだ行われておらず、本蛋白の同定は、パーキンソン病患者に対して脳神経移植などの治療を行う上で重要な要因の1つと考えられる。まず始めに黒質を破壊したモデルパーキンソン病ラットを作製し、その尾状核組織抽出液より産生される活性因子をゲル濾過、イオン交換、ヘパリンアフィニティのカラムクロマトグラフィー法にて分離精製した。精製段階において本物質は、FGFと同様にヘパリンカラムに特異的に吸着されるがFGF,NGFとは異なること、また脳幹のドーパミンニューロン及びPC12D細胞の突起伸展・生着を高めることを明らかにした。しかし、精製が進むにつれて活性分画が数種類に分かれ、その中には微量すぎて精製に困難である分画も存在した。そこで、Differential Display法を用いて、遺伝子からの同定も同時に行うことにした。その結果、黒質破壊側で優位に増加しているmRNAを数種類見つけた。これらはalpha-actinin,creatine kinase,Human clone HFBEF54に高いホモロジーを持つ遺伝子であった。しかし、これらがすべて栄養因子の活性を持つわけではなく、その配列情報から判断して目的の栄養因子の遺伝子である可能性は逆に少なかった。今後は、蛋白精製によって明らかにされる情報をもとに、例えばヘパリン結合部位の存在など、スクリーニングをかけ、目的の遺伝子の同定を行う予定にしている。

The central nervous system has a specific role to play in the development of neurologic disorders. The protein identity is important for the treatment of neurological transplant in patients with chronic diseases. In the beginning, the black substance was extracted from the caudate nucleus tissue extract, and the active factors were filtered, exchanged, separated and purified. In the purification stage, this substance specifically adsorbs to the same target molecule as FGF, but NGF is different from FGF. This makes it clear that the stem cells and the processes of PC12D cells can stretch and grow higher. There are many kinds of active components in the process of refining, but there are many difficulties in refining. Different Display methods are used in different ways. As a result, several types of mRNA have been found to increase in the quality of black matter. This is alpha-actin,creatine kinase,Human clone HFBEF54. The activity of the nutrient factor is determined by the allocation information, and the probability of the nutrient factor is reduced. In the future, protein purification will be carried out in the presence of information such as protein binding sites, protein binding sites, and target protein binding sites.