植物に存在するIAM経路のオーキシン生合成遺伝子に関する研究

植物IAM途径生长素生物合成基因的研究

• 批准号: 07740611
• 负责人: 川口 正代司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740611/
• 关键词: オーキシン生合成; インドールアセトアミドヒドロラーゼ; トリプトファンモノオキシゲナーゼ; イネ; カラタチ; 酵素精製

Agrobacterium等の植物病原菌に観察されるインドールアセトアミド(IAM)を経由するオーキシン(IAA)生合成経路の植物からの遺伝子クローニングを目的とし、材料的に最も得やすい、イネの培養細胞(Oryza sativa 日本晴)を用いてインドールアセトアミドヒドロラーゼ(IAM→IAA)の精製を行った。硫安沈殿、ゲル濾過、陰イオン交換カラム、MiniQ^<TM>カラムによる精製により、最終的に358.8倍まで精製した。この酵素はSDS-PAGEとゲル濾過の分析により50kDの分子量を有し、KmはIAMに対して0.96mM、インドールエチルエステルに対して0.55mMであることが判明した。またAgrobacteriumのIAMヒドロラーゼよりも加熱あるいは冷蔵保存に対して極めて安定であった。酵素の部分的アミノ酸配列の決定を試みたが、精製度の問題で明確にアミノ酸配列を読むことはできなかった。現在イネの培養細胞からcDNAを調製しE. coliでの発現ベクターを使用した活性発現からのクローニングを進行中である。一方植物からのトリプトファンモノオキシゲナーゼ(Trp→ IAM)遺伝子のクローニングは、バクテリアで既にクローニング及びシークエンシングされている7種の同遺伝子の相同性をもとに、約10種類のプライマーを作成し、カラタチDNAからのPCRによるDNA断片のクローニングを試みた。いろいろなPCRの条件を試してみたが、残念ながら未だ部分断片のクローニングには成功していない。

Plant pathogens such as Agrobacterium are detected in the presence of plant pathogens (IAM), and the production of plant pathogens (IAA) is carried out in the presence of plant pathogens (IAM). Sulfur precipitation, filtration, anion exchange, MiniQ^<TM>conversion, final purification 358.8 times SDS-PAGE and gel filtration analysis of the enzyme showed that the molecular weight of 50kD was 0.96 mM, and the molecular weight of Km was 0.55 mM. For example, if you want to use the IAM, you can use the IAM to heat up and cool down. The determination of the enzyme's partial acid sequence is tested, and the problem of the fine system is clearly identified. Now, the cultured cells are produced by cDNA modulation. coli is in progress. The identity of 7 species of isozyme in a plant is determined by PCR, and about 10 species of isozyme are determined by PCR. The conditions for PCR are as follows: